Методичка Гематология

Определение гемоглобина на фотоэлектроколориметре
Колориметрический 
визуальный 
метод 
определения 
всегда 
субъективен и поэтому неточен. Для получения точных объективных данных 
о светопоглощении применяют приборы, снабжѐнные фотоэлементами: 
ФЭК, спектрофотометры и др. 
Цель работы: Освоить методику определения гемоглобина
на 
фотоэлектроколориметре.
  Реактивы и оборудование: трансформирующий раствор: 0,5 мл 
ацетонциангидрина, 0,2 г железосинеродистого калия (красная кровяная 
соль), 1,0 г гидрокарбоната натрия, дистиллированная вода до 1л (реактив 
стоек, хранится в посуде из тѐмного стекла); стандартный раствор 
гемиглобинцианида; фотоэлектроколориметр. 
Порядок определения. К 5 мл трансформирующего раствора 
добавляют 0,02 мл (капилляр Сали) крови. При этом кровь разводят в 251 
раз. Содержимое перемешивают и оставляют в пробирках на 10 мин при 
комнатной температуре. Фотометрируют против дистиллированной воды при 
зелѐном светофильтре (длина волны 500-560 нм) в кювете с толщиной слоя 
10 мм. 
Стандартный раствор фотометрируют при тех же условиях, что и 
опытную пробу. 
Концентрацию гемоглобина в крови рассчитывают по формуле:
Еоп 
Нв = ------- х С х К х 0,01, 
Ест 
где Еоп – экстинция опытной пробы; Ест – экстинция стандартного 
раствора; С – концентрация гемиглобин-цианида в стандартном растворе, 
мг%; К – коэффициент разведения крови (251); 0,01 – коэффициент пересчѐта 
в г/л. 
По 
биохимической 
классификации 
гемоглобин 
относится 
к 
хромопротеидам, то есть к сложным цветным белкам, состоящим из белковой и 
небелковой группы. Молекулярная масса гемоглобина 66000 - 68000. 

---

53 
Гемоглобин составляет основную массу - 90% сухого вещества эритроцитов. Это 
сложный белок хромопротеид, состоящий из белковой части глобина - 96% и 
небелковой - гема -4%. Глобин состоит из двух пар пептидных цепей α- и β, 
каждая из которых состоит из 141-146 аминокислот. Видовые различия 
гемоглобина зависят от строения глобина. В молекуле гемоглобина - 4 молекулы 
гема. Гем состоит из 4 пирольных колец, которые окружают один атом 
двухвалентного железа и связаны между собой метиновыми мостиками. 
Содержание атома железа в молекуле гема обладает способностью присоединять 
и отдавать молекулярный кислород. Помимо ведущей роли в процессе дыхания, 
гемоглобин играет существенную роль в сохранении кислотно-щелочного 
равновесия. Молекула гемоглобина скомпонована в шаровидный клубок 
размером 65 х 55 х 50 Ǻ (ангстрем). В одном эритроците человека содержится 
около 460 млн. молекул гемоглобина. Гем у всех животных, имеющих красную 
кровь, имеет одинаковое строение. Он вступает в соединение с соляной 
кислотой и образует специфические кристаллы гемина бурого цвета, 
позволяющие отличить раствор гемоглобина от сходных по внешнему виду 
растворов. 
Гемоглобин синтезируется в рибосомах эритробластов, когда они 
находятся еще в красном костном мозгу. Образование гемоглобина происходит 
при участии РНК, поэтому между содержанием гемоглобина и РНК в 
эритроците имеется прямая зависимость. Следует отметить, что синтез 
гемоглобина в организме происходит значительно быстрее, чем образование 
любого другого белка, только при голодании отмечается замедление этого 
синтеза.
Содержание гемоглобина в крови здоровых животных отражено в 
таблице 4.