Методика проведения лабораторных анализов в свп, их клинико-диагностическое значение

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ УНИФИЦИРОВАННЫМ ГЕМИГЛОБИНЦИАНИДНЫМ МЕТОДОМ
Гемоглобин – основной белок эритроцитов, осуществляющий их главную функцию, т.е. обеспечение тканей кислородом. Гемоглобин относится к хромопротеидам и состоит из глобина (белковая часть) и гема (простетическая группа – соединение протопорфирина IX с железом). Термин «общий гемоглобин» на самом деле распространяется на совокупность ряда форм гемоглобина, которые присутствуют в крови у здоровых людей или же появляются при патологии. К ним относятся:

• 
  восстановленный гемоглобин (Hb), синонимы: гемоглобин (Hb⁺⁺), феррогемоглобин (Hb₄);
  
• 
  оксигемоглобин [HbO₂ или (HbO₂)₄];
  
• 
  метгемоглобин (MetHb), синонимы: гемиглобин (Hb⁺⁺⁺), ферригемоглобин (Hb₄ ⁺³);
  
• 
  карбоксигемоглобин (HbCO), синоним – карбонмоноксигемоглобин (HbCO)₄;
  
• 
  сульфгемоглобин (SHb), синоним – вердоглобин S;
  
• 
  гемиглобинцианид (HiCN), синоним – цианметгемоглобин (CNMetHb);
  
• 
  нитрозогемоглобин (HbNO);
  
• 
  нитрозобензолгемоглобин (HbNB);
  
• 
  метгемальбумин (MHAlb).
  

В крови здоровых людей обнаруживаются в основном оксигемоглобин и восстановленный гемоглобин, а также в небольших количествах мет- и карбоксигемоглобин.

Существуют разные методы определения содержания гемоглобина в крови. Наибольшее распространение получил метод Сали, так как он был наиболее простым и быстро выполним. Однако ошибка данного метода составляет ±30%. Поэтому этот метод не может быть рекомендован для определения содержания гемоглобина в крови. В настоящее время в качестве унифицированного метода определения содержания гемоглобина принят унифицированный гемиглобинцианидный метод.
Принцип метода. Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемигло-бин) железосинеродистым калием (красная кровяная соль); образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметрически.
Реактивы.

1. 
   Трансформирующий раствор:
   

ацетонциангидрин – 0,5 мг;
калий железосинеродистый – 0,2 г;
натрия гидрокарбонат – 1 г;
дистиллированная вода – до 1 л.
При приготовлении трансформирующего раствора вручную необходимо брать реагенты с квалификацией не ниже «хч». Раствор желтого цвета, прозрачный. При обесцвечивании или появлении осадка непригоден для использования. Стабилен в течении 3-х месяцев при хранении в посуде из темного стекла при комнатной температуре (замораживать нельзя).

2. 
   Калибровочный раствор гемиглобинцианида. Необходимо использовать фирменные стандартные растворы, где указаны концентрации гемиглобинцианида. Стандартные растворы хранят в холодильнике (не замораживать) в защищенном от света месте. При правильном храни они стабильны в течении года.