Методика проведения лабораторных анализов в свп, их клинико-диагностическое значение

Оборудование	Посуда
Реактивы
ФЭК	Центрифужные пробирки	Дистиллированная вода
Центрифуга	Высокие пробирки	Рабочий глюкозовый реактив
Термостат	Пипетки на 2,0 мл	Стандартный раствор глюкозы
	Микропипетки на 0,1 мл
	Кварцевые кюветы 10 мм

Взятие биоматериала. Забор крови производят натощак после 6-8 часового голодания, шприцем из вены в сухую центрифужную пробирку в количестве 1,0-2,0 мл.

1. 
   Кровь оставляют на 10 мин, затем иглой осторожно отслаивают содержимое пробирки от стенок.
   
2. 
   Центрифугируют 10 минут при 1500 об/мин
   
3. 
   Берут сыворотку в отдельную пробирку. Сыворотка может храниться в замороженном состоянии 1 мес.
   
4. 
   Для анализа используют 0,02 мл сыворотки.
   

Ход работы. В три пробирки отмеривают по 2 мл глюкозового реактива. В первую пробирку прибавляют 0,02 мл сыворотки крови (исследуемая проба), во вторую – 0,02 мл стандартного раствора глюкозы (стандартная проба) и в третью – 0,02 мл дистиллированной воды (контроль). Все пробы перемешивают и инкубируют в течении 15 минут при температуре 37°С. Затем измеряют оптическую плотность пробы и стандарта против контрольного раствора. Светофильтр синий (425-500 нм) в кюветах с рабочим расстоянием 10 мм.
Схема определения глюкозы в сыворотке крови

№ пробы	Глюкозовый реактив (мл)	Стандартный р-р глюкозы (мл)	Исследуемая проба (мл)	H2O (мл)	Условия опыта	Оптическая плотность
1	2,0	0,2	-	-	Термоста- тирование 37°С, 15мин	Еcт
2	2,0	-	0,2	-		Еоп
3	2,0	-	-	0,2		-

Пошаговое проведение методики

1. 
   Берут 3 сухие пробирки и нумеруют их (№1, №2, №3).
   
2. 
   Во все 3 пробирки наливают по 2,0 мл рабочего глюкозного реактива.
   
3. 
   В пробирку №1 (исследуемая проба) микропипеткой набирают 0,02 мл сыворотки.
   
4. 
   В пробирку №2 (стандартная проба) микропипеткой набирают 0,02 мл стандартного раствора глюкозы.
   
5. 
   В пробирку №3 (контрольная проба) микропипеткой набирают 0,02 мл дист воды.
   
6. 
   Перемешивают содержимое каждой пробирки.
   
7. 
   Термостатируют все пробы при 37⁰ С в течение 15 минут.
   
8. 
   Измеряют оптическую плотность (Е) на ФЭКе:
   

А) устанавливают синий светофильтр при длине волны 425-500 нм;
Б) оптическую плотность контрольной пробы принимают за ноль;
В) измеряют оптическую плотность стандарта против контроля (Е_ст);
Г) измеряют оптическую плотность опыта против контроля (Е_оп);
9. Расчет проводят по формуле: С_oп (ммоль\л) = (Е_oп\Е_cт)* 10,
где С_оп - концентрация глюкозы в исследуемой пробе в ммоль\л ; С_ст - концентрация глюкозы в стандартном растворе 10 ммоль\л; Е_оп - оптическая плотность раствора исследуемой пробы; Е_оп - оптическая плотность раствора стандартной пробы.