Microsoft Word 60 2012 Белясова doc

Получение интерферонов. Об интерферонах человека уже шла 
речь в теме «Белковая инженерия». Напомним, что интерфероны – 
группа белков с рядом общих свойств, главным из которых является 
способность при контакте с клетками вызывать в них устойчивость к 
вирусной инфекции. Интерфероны позвоночных, в т. ч. человека, раз-
деляют на три группы – 
α-, или лейкоцитарные, β-, или фибробласт-
ные, и 
γ-, или иммунные. Они различаются структурой молекул, ря-
дом биологических свойств и типом клеток, которые их продуцируют 
в организме. 
Цефалоспорин- 
ацилаза 

---

158 
При выделении кДНК интерферонов пришлось преодолеть 
трудности, связанные с недостаточным содержанием соответ-
ствующих мРНК и белков. Процедура выделения кДНК состояла в 
следующем: 
– из лейкоцитов человека выделили мРНК и фракционировали ее 
по размерам; провели обратную транскрипцию и встроили в сайт Pst 
плазмиды pBR322; 
– полученным вектором трансформировали E. coli. Отобрали 
6000 клонов и разделили их на 12 групп; 
– каждую группу клонов гибридизовали с неочищенным препара-
том мРНК (интерферонной); 
– из гибридов, содержащих мРНК и клонированную ДНК, выде-
лили мРНК и провели ее трансляцию в бесклеточной системе синтеза 
белка; 
– определили интерферонную противовирусную активность каж-
дой смеси, полученной в результате трансляции. Группы, проявившие 
интерферонную активность, содержали клон с кДНК, гибридизовав-
шийся с мРНК (интерферонной); 
– позитивные группы разбили на 8 подгрупп, содержащих по 
64 клона, и вновь провели тестирование. Повторяли такую процедуру 
до тех пор, пока не идентифицировали клон, содержащий полнораз-
мерную мРНК (интерферонную) человека. 
Когда необходимо получить большое количество интерферона, 
соответствующую кДНК субклонируют в экспрессирующем векторе 
E. coli, который позволяет достичь высокого уровня экспрессии.