Microsoft Word 60 2012 Белясова doc

часть, так что невозможно изучить ни его структуру, ни свойства про-
дукта. Однако при введении рекомбинантных ДНК (вектор со встав-
кой) в клетки или вирусные частицы способность к репродукции в 

---

99 
каждой клетке (вирусной частице) приобретает только один тип гиб-
ридной ДНК. Выделив клон или содержимое бляшки, можно их инку-
бировать и получать неограниченное количество клонированных ге-
нов, а также их продуктов. 
В предыдущем подразделе уже описано несколько схем клони-
рования фрагментов ДНК в составе разных векторов (рис. 2.5–2.7). 
Обобщая этот материал, следует отметить, что для клонирования ге-
нов используют самые разнообразные системы «вектор – хозяин». 
При этом наибольшее распространение получили системы, в которых 
реципиентными клетками служат бактерии E. coli. Рекомбинантные 
ДНК вводят в клетки хозяина или вирусные частицы различными 
способами. 
Введение молекул ДНК в клетки. Среди различных способов 
введения гибридных ДНК, сконструированных in vitro, в пермиссив-
ные (способные обеспечить репликацию этих молекул) клетки для по-
лучения большого числа клонов гибридов используют несколько ме-
тодов. Среди них наиболее часто применяют трансформацию и 
трансфекцию интактных клеток и их протопластов, а также инфекцию 
и электропорацию, которая в последнее время стала очень популяр-
ным и распространенным приемом. 
Трансформация и трансфекция клеток уже описаны в подразд. 1.2. 
Напомним общие закономерности. 
Трансформация – это процесс, в ходе которого свободная (экзо-
генная) ДНК проникает в реципиентную клетку и обусловливает ее 
наследуемые изменения. Этот метод используют для введения в клет-
ки плазмидных векторов. Суть его состоит в том, что клетки перево-
дят в компетентное состояние (для E. coli обрабатывают клетки ка-
тионами кальция, что индуцирует фазовый переход липидов наруж-
ной мембраны, в результате чего из двухслойной она превращается в 
гексагональную, в условиях теплового шока это сопровождается по-
глощением экзогенных двухцепочечных молекул ДНК) и добавляют в 
суспензию раствор плазмидных ДНК (в нашем случае – векторов со 
вставками, химер). После этого суспензию высевают на агаризован-
ную среду для отбора клонов, состоящих из трансформированных 
клеток, которые называют трансформантами. Эффективность транс-
формации обычно выражают количеством клонов трансформантов, 
приходящихся на молекулу или единицу массы донорной ДНК. 
Обычно она невысока и составляет 10
–5
–10
–2
на донорную молекулу 
(иными словами, только 1 из 500–10 000 молекул ДНК обеспечивает 
получение клетки-трансформанта). 

---

100