Mikrobiologiya va

OITS kasalligi laboratoriya tashxisi
Laboratoriya tashxisida asosiy yo'nalish, OIV va uning market lai ini, immun sistemasidagi o'zgarishlarni aniqlash hisoblanadi. Tekshiiish uchun bemordan qon" sperma. ko'krak suti, likvor olinadi. Virusni elektron mikroskop yordamida koi'ish mumkin.
Serologik usullardan: IFR, IFA. RIA. immunobloting kabi reaksiyalar bemor va tashib yuruvchilar qonidagi virusga qarshi antitelalaini aniqlash
imkonini beradi.
Immunoferment usulida OITV antitelasini kasal qoil zardohl
tarkibida aniqlash. ,
Usulni qo'yishda maxsus avtomatik mikropipetka dozatotlardan foydalaniladi. I FA immunosorbent polisterol 96 chuqurchali planshetkalai da yoki striplarda qo'yiladi. Test sistema tarkibidagi ingridiyentlar uslubiy qo'llanmaga asosan suyultiriladi.


285

Ish tartibi

1. 
   Immunsorbent chuqurchalarga OITV I-konyugatidan ishchi dozasida 0,25 mkl tomiziladi. So'ngra planshetka chuqurchasiga 0.75 mkl nazorat namunasidan (K+, K-) qo^;shiladi. Nazorat namunalarini ishlatish qo‘llanilayotgan striplarning soniga bogiiq boiganligi uchun quyidagi sxemani qo'llash mumkin:
   

1. 
   stripda -1 chuqurcha К-К 2 chuqurcha K-:
   
2. 
   stripda - 2 chuqurcha K+, 2 chuqurcha K-;
   
3. 
   va undan ortiq -2 chuqurcha K+. 3 chuqurcha K-.
   

Masalan, agar IFA 2 ta stripda qo'yilayotgan boisa. stripni A-l va A-2 chuqurchalarigamikrodozatoryordamida 0.75 mkl K+. va 2 tachuqurchaga V-l va V-2 ga esa 0,75 mkl K- nazorat namunalaridan tomiziladi.
Qolgan chuqurchalarga 0.75 mkl tekshirilayotgan qon zardob namunasidan tomiziladi. Chuqurchadagi ingridiventlar yaxshilab aralashtiriladi (planshetkaning qirrasini sekin- sekin urish bilan). Planshet qopqogi berkitilib 37°C 60 daqiqa saqlanadi.

2. 
   Planshetdagi ingridiventlar (vosher) planshetni yuvish moslamasi yordamida olinib dezinfeksiyalovchi suyuqlik bor idishga to'kiladi. planshet 4 marotaba yuvuvchi ishchi rastvor bilan yuviladi. Har bir yuvishda 40 Soniya eritma ushlab turiladi va dezinfeksiyalovchi suyuqlik bor idishga to‘kiladi.
   
3. 
   Hamma strip chuqurchalariga 100 mkl konyugat-2 ni ishchi dozasida mikropipetka yordamida tomiziladi. Planshet qopqogi berkitilib 37°C 30 daqiqa saqlanadi.
   
4. 
   Planshetdagi ingridiyentlar (vosher) planshetni yuvish moslamasi yordamida olinib dezinfeksiyalovchi suyuqlik bor idishga to‘kiladi. planshet 4 marotaba yuvuvchi ishchi eritmada yuviladi.
   
5. 
   Hamma strip chuqurchalariga 100 mkl SS (substrat aralashmasi, bufer eritma) tomiziladi. Planshet qopqogi berkitilib qorongi joyda 20— 24°C 25-30 daqiqa saqlanadi.
   
6. 
   Planshetdagi reaksiyani to‘xtatish uchun hamma chuqurchalarga 100 mkl dan stop —reagent qo'shiladi va 1—2 daqiqa dan keyin natija aniqlanadi.
   

Reaksiya natijasini aniqlash. Reaksiya natijalari toiqin uzunligi 450 nm boigan spektrofotometrda va 620-680 nm referens-yorugiik filtrda aniqlash mumkin. Reaksiyani ro‘y berganligi aytish mumkin, qachonki K+ chuqurchadagi aniqlangan optik zichlik (OZ) 1,0 dan kam boimasa va K- na munali chuqurchadagi OZ o^krtacha ko‘rsatkichi 0, 15 oshmasa.


286




Masalan. tekshirilayotgan namunaning natijasi bitta 450 nm to'lqin uzunlikda aniqlansa, bu holda reaksiya musbat deb hisoblash mumkin qachonki. K+ chuqurchadagi aniqlangan optik zichlik (OZ) 1,0 dan kam boMmasa va K- namunali chuqurchadagi OZ o‘rtacha ko‘rsatkichi 0, 2 oshmasa (K- namunani OZ ning oitacha ko'rsatkichi 0,2 teng).