O’zbekiston Respublikasi Oliy ta’lim, Fan va innovattsiyalar Vazirligi Mirzo Ulug’bek nomidagi

2.3 . Hujayralar
E. coli HMS174 xujayralari yarim sintetik muhit bilan dasturlashtiriladigan, mantiqiy boshqariladigan reaktorda o'stirilgan. Azot manbasini ta'minlash uchun vosita litriga 2,5 g NH ₄ Cl va 2,1 g (NH ₄ ) ₂ SO _{4 bilan to'ldirildi.}  Dastlabki o'sishni tezlashtirish uchun xamirturush ekstrakti (0,15 g / g quruq hujayra massasi) qo'shildi . Bioreaktorda media sterilizatsiya qilingandan so'ng, pH 12,5% ammiak eritmasi bilan 7 ga o'rnatildi. Sintetik muhit keyingi oziqlangan partiya madaniyati uchun ishlatilgan. Buferlash qobiliyatini ta'minlash va fosfat va kaliy manbai bo'lib xizmat qilish uchun bufer (3 g KH ₂ PO ₄ va 4,58 g K ₂ HPO ₄ litr muhit uchun) qo'shildi. Boshqa vosita komponentlari 1 g biomassa hosil qilish uchun etarli miqdorda qo'shildi : 0,25 g C ₆ H ₅ Na ₃ O ₇ × 7 H ₂ O, 0,10 g MgSO ₄ × 7H ₂ O, 0,02 g CaCl ₂ × 2H ₂ O, 50 mL mikroelement eritmasi va 3,3 g C ₆ H ₁₂ O ₆ × 1H ₂ O. Rekombinant superoksid dismutaza (SOD) ni ifodalovchi E. coli yetishtirish uchun 4 mg CuCl ₂ × 2H ₂ O va 3,2 mg ZnSO ₄ × 7H _2. O g quruq hujayra massasi qo'shildi. Rekombinant oqsillar, yashil floresan oqsil mutant 3.1 (GFPmut3.1) va SOD, 20 mkM / g quruq hujayra massasida izopropiltio-b-galaktozid (IPTG) qo'shilishi bilan ifodalangan. Taxminan 10 L hujayrali bulon oziqlangan partiya madaniyatidan to'plangan va 4 ° C da saqlanadi. GFP va SOD uchun ekstraksiya va gomogenlash tajribalari reaktordan hujayra bulyoni yig'ilgandan keyin 1-20 soat ichida boshlandi . Bu vaqt oralig'ida hujayra suspenziyalari va granulalar 4 ° C da saqlanadi .
2.4 . Yuqori bosimli gomogenizatsiya
Hujayralar fermentatsiya bulonidan 23 ° C da santrifüjlash (50 ml 4000 × g da 10 daqiqa) orqali yig'ilgan . Hujayralar 25% (v / v) hujayralar konsentratsiyasida 50 mM TRIS, pH 8.0 va 100 mM NaCl o'z ichiga olgan buferda to'xtatildi ; keyin, Panda2k gomogenizatorida (GEA Niro-Soavi, Parma, Italiya) 100 MPa lik ikkita tsiklni qo'llash orqali 100 ml hujayralar partiyasi yuqori bosimli gomogenizatsiya bilan buzildi .