Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 27 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
analyst did not contaminate the sample. Analysts should be sanitizing their 
gloves throughout the sterility analysis and changing gloves when needed.
However, changing gloves prior to performing personnel monitoring is 
unacceptable. Each laboratory is required to monitor and trend data to ensure 
compliance and detect any abnormalities.
H. Sub-culturing Primary Media 
Daily observations of primary test media (THIO and SCD) containing product 
should be performed without unnecessary disturbance. All handling of positive 
tubes, streaked plates, or subsequent inoculations of additional media will be 
done outside the clean room. These culture transfers are to be performed 
within a HEPA filtered biosafety cabinet or equivalent outside the ISO5 area 
which has been cleansed with an effective sporicidal/disinfectant anti-microbial 
agent. The analyst should be gowned with at least sterile gloves, sterile 
sleeves and a mask to minimize any possible cross contamination. 
1. Record on Analyst's worksheets the day that the primary isolation 
media, Fluid Thioglycollate Broth (THIO), or Soybean-Casein Digest 
Broth (SCD) is turbid and inform supervisor. Streak tubes on the 
day they first appear positive and again at 14 days to determine the 
presence of other possible slow-growing (i.e., fungi) microorganisms. 
2. Within a HEPA filtered biosafety cabinet or equivalent outside the 
clean room, streak turbid tubes onto Modified Soybean-Casein 
Digest Medium [SCD broth + 1.5% agar] (Modified SCDA) or other 
non-selective agar plate. 
3. All streaked plates are incubated for a period at least as long as 
required for growth in original isolation media (THIO or SCD) not to 
exceed seven days. 
4. Subculturing from Fluid Thioglycollate Broth (THIO) 
a. Subculture Thioglycollate broth to general medium agar plates in 
duplicate. Streak two plates; incubate one aerobically, and one 
anaerobically, each at 32.5 ± 2.5 ºC. NOTE: It is suggested to 
transfer an aliquot of media from close to the bottom of the tube 
to maximize the recovery of strict anaerobes.
i. Note if any growth is observed on the anaerobic plate which 
differs from growth on the aerobic plate. Pick a single 
representative colony and perform an aero-tolerance test in 
order to determine if a strict anaerobe has been recovered. 
Proceed with identification of any strict anaerobes recovered 
when isolation is complete.

---