Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 48 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
as API or VITEK should be performed. Contaminated primary and/or working 
cultures cannot be used for antibiotic testing; likewise, all antibiotic potency 
data generated using contaminated cultures will be considered as invalid.
A test inoculum is prepared from a working culture. Inoculum preparation is a 
multi-step and multi-day process. Preparation of the inoculum requires a basic 
knowledge of microbiology, aseptic technique and laboratory safety. Refer to 
USP <81> Antibiotics- Microbial Assays, for test organism and inoculum 
preparation. The test inoculum is a solution containing the live test 
microorganism diluted with a method specific diluent. To be viable, the 
microorganisms used in the test inoculum must be within 5 passages of the 
primary test microorganism.
Verification of the test inoculum is performed prior to sample testing. 
Verification is a preliminary test which evaluates the potency, purity and 
robustness of the test inoculum when challenged against a known median 
reference standard ([S
3
]) and standard curve ([S
1
], [S
2
], [S
4
]
and [S
5
]). Refer to 
USP <81> for inoculum verification, testing parameters and acceptable data 
requirements and Section D, Antibiotic Standard and Sample Solution 
Preparation. As previously stated, acceptance testing requirements and 
acceptance criteria are as follows: 
The USP <81> states the following criteria for both the Plate and Tube 
Methods:
1. The calculated potency of the test antibiotic/unknown samples ([U
3
]) 
must be 80% to 125% of the median reference standard ([S
3
]); 
2. Relative standard deviation for all measured (i.e. millimeters or 
absorbance) and calculated data (e.g. averages) is NMT 10%; and,
3. Testing is performed in triplicate over a period of three independent 
test runs
The USP <81> Plate Method further states:
1. The percentage coefficient of determinations (%R
2
) for each standard 
curve will be NLT 95% (i.e. correlation coefficient of NLT 0.9750); and,
2. ZOIs for all media reference standard ([S
3
] will measure between 14-16 
mm).
The USP <81> Tube Method further states:
1. The percentage coefficient of determinations (%R
2
) for each standard 
curve will be NLT 90% (i.e. correlation coefficient of NLT 0.950); and,

---