Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 46 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
point standard functions as the testable detection range and is prepared from a 
traceable and within expiry USP Reference Standard (RS).
The USP <81> states the following criteria for both the Plate and Tube 
Methods:
1. The calculated potency of the test antibiotic/unknown sample ([U
3
]) 
must be 80% to 125% of the median reference standard ([S
3
]); 
2. Relative standard deviation for all measured (i.e. millimeters or 
absorbance) and calculated data (e.g. averages) is NMT 10%; and,
3. Testing is performed in triplicate over a period of three independent 
test runs
The USP <81> Plate Method further states:
1. The percentage coefficient of determinations (%R
2
) for each standard 
curve will be NLT 95% (i.e. correlation coefficient of NLT 0.9750); and,
2. ZOIs for all media reference standard ([S
3
] will measure between 14-16 
mm).
The USP <81> Tube Method further states:
1. The percentage coefficient of determinations (%R
2
) for each standard 
curve will be NLT 90% (i.e. correlation coefficient of NLT 0.950); and,
2. Absorbance values of the media reference standard ([S
3
]) are 
predetermined per antibiotic. Refer USP <81> for testing parameters and 
acceptable data requirements.
B. Equipment 
Antibiotic potency testing is a quantitative test dependent upon the preparation 
and use of growth media, reagents, test organism and antibiotic standards; 
therefore, Class A volumetric glassware is used in the preparation of the test 
antibiotic/unknown sample, reference standard and dilutions of the reference 
standard. Class A glassware is physically labeled either “to deliver” (TD) or “to 
contain” (TC). An understanding of Class A glassware prior to laboratory use is 
required. For example, a high viscous liquid (e.g. antibiotic ointment) cannot be 
delivered from a “to deliver” Class A pipette. “To deliver” Class A pipettes 
solely rely on gravity to assist in evacuation. In the case of the antibiotic 
ointment, the ointment would remain in the Class A pipette at time of 
evacuation. However, USP <81> states sterile and disposable glassware can 
also be used for any measurement of test antibiotic/unknown sample, 
reference standard and dilutions of the reference standard. 
Standard laboratory glassware such as beakers, funnels, flasks, roux and 1-2 
liter bottles are also required. Sterile and disposable equipment such as test 

---