Учебно-методическое пособие по биологической химии часть 2 Обмен белков, обмен липидов, биохимия крови, печени, мочи, слюны

Принцип метода: холестерин в соединениях с уксусным ангидридом,
серной кислотой и сульфосалициловой кислотой принимает изумрудную 
окраску. 
Порядок выполнения работы: 
В сухую пробирку внести 4 капли сыворотки крови, добавить 4 капли 
ледяной уксусной кислоты, затем 20 капель сульфосалициловой кислоты, 3 
мл уксусного ангидрида (из бюретки). Не размешивая смесь, оставить 
пробирку при комнатной температуре на 10 минут для охлаждения. 
Через 10 минут к смеси добавить 8 капель концентрированной серной 
кислоты и перемешать содержимое пробирки. Поставить пробу в темноту 
(можно в термостат) при температуре 20°С на 30 минут для развития окра-
ски. Параллельно ставится контрольная проба (две на группу). Порядок 
выполнения тот же, но вместо 4 капель сыворотки крови внести 4 капли 
дистиллированной воды. 
Через 30 минут проколориметрировать на ФЭКе опытную пробирку 
против контрольной при красном светофильтре и толщине кюветы 0,5 см. 
 
 

---

44 
Расчет: количество общего холестерина рассчитывается по формуле: 
Е – экстинкция раствора, 
667 – эмпирический коэффициент,
38,7 – пересчет на ммоль/л. 
Протокол опыта оформить произвольно, сделать заключение о содер-
жании общего холестерина в сыворотке крови. 
В. Определение холестерина в сыворотке крови методом 
Златкис-Зака 
При действии СН
3
СООН и H
2
SO
4
на холестерин в присутствии FeCl
3
образуется красно-фиолетовое окрашивание, интенсивность которого про-
порциональна концентрации холестерина. 
Порядок выполнения работы: 
Используются только сухие пробирки. 
К 1 капле сыворотки крови прилейте осторожно 2,5 мл рабочего рас-
твора хлорного железа (рабочий раствор), содержащего концентрирован-
ную уксусную и серную кислоты. Закройте пробкой содержимое пробир-
ки, тщательно перемешайте и оставьте при комнатной температуре на 30 
минут. Проколориметрируйте опыт на ФЭКе против дистиллированной 
воды при зеленом светофильтре в кювете шириной 0,5 см. 

---

45 
Расчет проводите по калибровочному графику: 
Содержание холестерина в норме 120-250 мг%. Данные оформить в ви-
де протокола, сделать вывод.