Учебно-методическое пособие по биологической химии часть 2 Обмен белков, обмен липидов, биохимия крови, печени, мочи, слюны

Цель работы: научиться количественно характеризовать активность 
липазы в динамике по степени гидролиза нейтрального жира. 
Принцип метода: об активности липазы можно судить по количеству 
свободных жирных кислот, выделившихся в единицу времени при гидро-
лизе нейтрального жира. Количество жирных кислот определяется титро-
ванием 0,05 н. раствором гидроксида натрия. 
Скорость ферментативной реакции при прочих равных условиях зави-
сит от концентрации фермента и субстрата. С увеличением времени воз-
действия фермента на субстрат глубина гидролиза возрастает, свидетель-
ством чего является нарастание количества продуктов реакции в реакци-
онной смеси. 
Порядок выполнения работы: 
В 6 пробирок налить по 1 мл молока и по 2 капли раствора липазы 
(строго соблюдать количество). В 1-ю пробирку добавить 1 каплю 1% рас-
твора фенолфталеина и содержимое немедленно оттитровать 0,05н. рас-
твором NaOH до устойчивого розового цвета. Остальные 5 пробирок оста-
вить при комнатной температуре и через каждые 10 минут поочередно от-
титровать 0,05н. раствором NaOH в присутствии фенолфталеина. 
Изобразить графически процесс гидролиза жиров под действием фер-
мента липазы, откладывая на оси абсцисс время взаимодействия фермента 
и субстрата, на оси ординат – количество щелочи, пошедшее на каждое 
титрование. 
Сделать заключение по обнаруженной закономерности. 

---

38 
Работа 18. ВЛИЯНИЕ ЖЕЛЧИ НА АКТИВНОСТЬ ЛИПАЗЫ 
Цель работы: уяснить биологическую роль желчных кислот в эмуль-
гировании и гидролизе нейтрального жира. 
Порядок выполнения работы: 
В 2 колбы на 50 мл внести по 20 мл молока, разбавленного в 5 раз, до-
бавить по 2 мл вытяжки липазы (глицериновый экстракт поджелудочной 
железы). В опытную колбу добавить 1 мл желчи, в контрольную 1 мл дис-
тиллированной воды, тщательно перемешать. 
Из обеих колб сразу же отобрать по 2 мл смеси, перенести в чистые 
стаканчики, добавить по 2 капли фенолфталеина и оттитровать из бюретки 
0,01н. раствором гидроксида натрия до устойчивого слаборозового окра-
шивания. При этом оттитровываются свободные жирные кислоты, присут-
ствующие в молоке. Оставшуюся смесь поставить в термостат (+ 37°С). 
Через 15, 30, 45, 60 минут повторно сделать заборы проб из опытной и 
контрольной колб (по 2 мл), оттитровать 0,01 н. раствором гидроксида на-
трия. 
Данные занести в таблицу. 
Время
Объем 0,01 н. NaOH,
пошедшего на титров, (в мл)
инкубации
опытная проба
контрольная проба
в мин.
(с желчью)
(без желчи)
Исходное
15
30
45
60
По результатам построить графики, где на оси абсцисс отложить время 
в минутах, на оси ординат – мл щелочи, пошедшей на титрование. Срав-
нить активность липазы в присутствии желчи и без, сделать вывод о роли 
желчных кислот в переваривании липидов. 

---

39 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Работа 19. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩИХ ЛИПИДОВ КРОВИ ТУРБИ-