Учебное пособие для студентов 1-2 курсов лечебного, педиатрического, стоматологического факультетов Новосибирск 2011 Под редакцией профессора В. И. Шарапова

Норма: АЛТ- 0,1-0,68 мкм/л.ч

АСТ- 0,1-0,45 мкм/л.ч

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №3

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ПСЕВДОХОЛИНЭСТЕРАЗЫ СЫВОРОТКИ КРОВИ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.

Значение метода: определение сывороточной псевдохолинэстеразы имеет важное значение, как метод функционального исследования печени. Этот фермент синтезируется в клетках печени и относится к группе секреторных ферментов. При нарушении белоксинтезирующей активности печени, содержание фермента в сыворотке крови сокращается.

Принцин метода: метод основан на фотометрическом определении концентрации уксусной кислоты, образованной при гидролизе ацетилхолинхлорида ацетилхолинэстеразой сыворотки крови.
Ход работы:
1 этап. В 2 пробирки (опыт и контроль) разливают 2,5 мл вероналового буфера с индикатором феноловым красным (рН 8,4) приливают 0,05 мл сыворотки крови и прогревают 5 минут в термостате при 37 градусах Цельсия.
2 этап. В обе пробирки приливают 0,1 мл (2-3 капли) ацетилхолинхлорида.
В контрольную пробу добавляют 2-3 капли прозерина (ингибитор фермента) и инкубируют при 37 градусах Цельсия в течение 30 минут.
3 этап. После инкубации сразу же в опытную пробу добавляют 0,1мл (2-3 капли) прозерина, ингибитора фермента. Смесь охлаждают при комнатной температуре.
4 этап. Производят измерение оптической плотности опытной пробы против контроля на ФЭКе в кювете на 0,5 см при зеленом светофильтре. Окраска устойчива в течение часа.
Расчет: из показателя оптической плотности холостой пробы вычитают показатель оптической плотности опыта и по калибровочному графику находят активность фермента, которая выражается в микромолях уксусной кислоты, образовавшейся при инкубации 1 мл сыворотки крови в течении часа при 38 градусах Цельсия.
Норма: 160-340 мкМ./ час.


ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №4
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.