Учебное пособие для студентов 1-2 курсов лечебного, педиатрического, стоматологического факультетов Новосибирск 2011 Под редакцией профессора В. И. Шарапова

Норма 63-83 г/л.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРАНСАМИНАЗНОЙ АКТИВНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ.

Значение метода: Аминотрансферазы (АЛТ и АСТ) представляют собой ферменты, участвующие в переносе аминогрупп от альфа-аминокислот к альфа- кетокислотам. Коферментом в этой реакции является производная Вит В6- пиридоксальфосфат. Аминотрансферазы относятся к широко распространенным ферментам в организме, к ряду внутриклеточных. В сыворотке крови активность этих ферментов в норме не высока. Органические поражения при острых и хронических заболеваниях, сопровождаются деструкцией клеток, приводят к выходу трансаминаз из очага поражения в кровь.
АЛТ-содержится в высоких концентрациях в печени и в меньших количествах в скелетных мышцах, почках, сердечной мышце. Значительное повышение (в 10-100 раз) активности АЛТ в крови наблюдается при вирусном гепатите, токсическом некрозе печени. Особое значение имеет определение АЛТ в инкубационный период вирусного гепатита, а также для постановки диагноза при безжелтушной форме этого заболевания и эффективности лечения.
АСТ- широко распространена с высокими концентрациями в сердце, печени, скелетных мышцах, почках, эритроцитах. Повреждение любой из этих тканей может привести к повышению концентрации АСТ в сыворотке крови. Особое значение определения АСТ имеет для диагностики инфаркта миокарда и динамики заболевания. Уже через три часа после заболевания АСТ повышается, в сыворотке на 4-5 сутки наблюдается пик подъема, к 7 суткам активность АСТ должна вернуться к норме.
Активность АСТ определяется также в ротовой жидкости. Источником АСТ являются эпителиальные клетки, фибробласты, лейкоциты крови и плазма крови. В норме активность АСТ в ротовой жидкости следовая. Увеличение активности АСТ говорит о повреждении тканей парадонта и может служить одним из признаков гингивита.
Принцип метода: О трансаминазной активности сыворотки крови судят по количеству ПВК, образующейся при переаминировании из аланина или в результате декарбоксилирования щавелеуксусной кислоты, образующейся при переаминировании из аспарагиновой кислоты (АСТ). ПВК взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином, с образованием 2,4-динитрофенилгидразона пировиноградной кислоты. При обработке динитрофенилгидразона щелочью образуется окрашенное в красный цвет соединение. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству ПВК.
Ход работы: В пробирку вносят 0,1мл сыворотки и 0,5мл субстратной смеси, составленной из аланина и альфа-кетоглутаровой кислоты. Пробирку помещают в термостат при 37 град С на 15 минут, затем добавляют 0,5мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина и оставляют стоять при комнатной температуре на 10 минут, после чего приливают 5мл NаОН и через 10-15 минут колориметрируют на ФЭКе в кювете на 0,5см с зеленым светофильтром против контроля.
Контроль: К 0,2мл Н2О приливают 1мл субстратной смеси, 1мл 2,4- динитрофенилгидразина и через 15 минут 10мл NаОН (обязательно соблюдать порядок добавления реактивов). После фотометрирования используют калибровочный график. Активность АЛТ выражают в МКМ ПВК, образованной под действием ферментов, содержащихся в 1мл слюны за час при 37 град