Учебное пособие для студентов 1-2 курсов лечебного, педиатрического, стоматологического факультетов Новосибирск 2011 Под редакцией профессора В. И. Шарапова

Принцип метода: Под действием фермента сыворотки крови бета-глицерофосфат подвергается гидролизу с освобождением неорганического фосфата, по которому судят об активности данного фермента.
Ход определение: Тщательно сполостнуть дистиллированной водой пробирки и воронки.

РЕАКТИВЫ	ОПЫТ	КОНТРОЛЬ
1.Раствор бета-глицерофосфата	1мл	1мл
2. Сыворотка	0,1мл инкубация 30 мин при 37градусах	-
3. ТХУ-10%	1мл	1мл
4.СЫВОРОТКА	-	0,1 мл
Тщательно перемешать и фильтровать через смоченный дистиллированной водой фильтр. К фильтрату добавить:
5. Молибденовый раствор	1мл	1мл
6. Раствор аскорбиновой кислоты	1мл	1мл
Перемешать и через 10 мин. колометрировать контроль и опыт против Н20 (красный светофильтр, кюветы 5 мл). РАСЧЕТ: Из коэффициента светопоглощения опыта (Е оп) вычесть коэффициент светопоглощения контроля (Е контр). Разность посмотреть по калибровочному графику. В норме активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови взрослых 1,0-6,0 мм/час л., у детей до 6лет 2,5-15 мм/час до 16 лет 5,0-30,0 мм/час л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №5
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АМИЛАЗЫ (ДИАСТАЗЫ) В МОЧЕ АМИЛОКЛАСТИЧЕСКИМ СПОСОБОМ.
Значение метода: Диастаза (альфа-амилаза) является экскреторным ферментом. Наиболее богаты амилазой поджелудочная и слюнные железы. В норме активность этого фермента в крови сравнительно невелика в связи с тем, что амилаза-низкомолекулярный белок, она проходит через почечный фильтр и определяется в моче. Повышение амилазной активности мочи прежде всего связывается с повреждением клеток поджелудочной железы (увеличение проницаемости мембран, некротизированных клеток, нарушение оттока секрета в 12-перстную кишку). Так, при остром панкреатите амилазная активность мочи может увеличиться в 10-30 раз. Повышение амилазной активности мочи, но в меньшей степени, может сопровождать воспаление слюнных желез (острый паротит). Снижение активности амилазы в плазме крови наблюдается при уменьшении синтеза фермента при снижении функции поджелудочной железы, склерозировании органа.
Принцип метода: Основан на фотометрическом измерении падения концентрации крахмала в результате ферментативного гидролиза.
Ход работы:
РЕАКТИВЫ ОПЫТ КОНТРОЛЬ
1. Крахмал 2% 0,5 нагрев 0,5 нагрев
2.Фосфатный буфер 0,3 10 мин 0,3 10 мин
3. Nа СI 3% 0,1 при 37градусах 0,1 при 37 градусах
4.НСI (1Н) --- инкубировать 0,1 инкубировать
5.Моча 0,1 30 мин - 30 мин
6.Н20 при 37 градусах 0,1 при 37 градусах
Реакцию ОПЫТА прерывают прибавлением 0,1мл НСI
По 0,2 мл содержимого пробирок ОПЫТА и КОНТРОЛЯ переносится в разные колбы емкостью 50 мл. В каждую из колб прибавляют примерно по 40 мл воды, 0,5 НСI и 0,1 мл раствора йода и доливают до метки дистил. водой. Еоп и Е контр измеряют на ФЭКе при красном светофильтре с толщиной кюветы 1см, против воды. Амилазную активность мочи выражают через количество мг крахмала, гидролизованного амилазой, содержащей в 1мл мочи за 60 мин при 37 градусах.
Расчет
Е контр-Еоп * 10 * 20 *10
Хмг крахмала= ----------------------------
Еконтр
Где: Е-экстинкция или коэффициент
10-количество мг крахмала, введенного в опытную и контрольную пробы.
20-коэффициент перерасчета на 1мл биологической жидкости за час инкубации .
10-разведение мочи