Норма: 80-160 мг крахмала, гидролизованного 1мл биологической жидкости за час инкубации при 37 градусах Цельсия.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №6
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ О-ТОЛУИДИНОВЫМ МЕТОДОМ.
Принцип метода: Альдогексозы (глюкоза, галактоза, ксилоза ) при нагревании с орто- толуидином в кислой среде дают синезеленое окрашивание, интенсивность которого определяется колометрически.
Ход работы: 0,2мл сыворотки крови (спинномозговой жидкости) вносят в пробирку с 2мл 6% ТХУ. Содержимое пробирки перемешивают и фильтруют. К фильтрату приливают 2мл. О-толуидинового реактива и ставят на 8 минут в кипящую баню. После охлаждения (15 мин) фотометрируют при красном светофильтре. В качестве контроля используется вода. Параллельно определяют светопоглощение стандартного раствора глюкозы (0,05мл глюкозы) обработанного так же, как и опытная проба.
А
Расчет: ------ х 200 = мг %
Б х 4
А-светопоглошение образца
Б-светопоглощение раствора глюкозы (800 мг на 100мл)
Норма: кровь –70-110мг %, плазма-60-100мг %, спинномозговая жидкость-45-70мг %.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №7
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ (ПО ОКИСЛЕНИЮ ФЕНОЛФТАЛЕИНА).
Принцип метода:
В-d глюкоза + в-d глюкозооксидаза глюколактон + ФАДН2
-------------------------
ФАД
ФАДН2+О2 = ФАД +Н2О2
Образующаяся перекись водорода в присутствии ионов меди окисляет фенолфталин до фенолфталеина, который в щелочной среде окрашен в красный цвет.
Ход работы: 0,2 мл сыворотки крови вливают в 2мл 5% ТХУ, перемешивают и фильтруют через смоченный водой фильтр. К фильтрату прибавляют 2мл 0,25 моль/л фосфата натрия и 2 капли раствора глюкозооксидазы. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем добавляют 2 мл рабочего реактива и через 10мин. фотометрируют в кюветах толщиной 1 см при зеленом светофильтре против дистилированой воды.
Количество глюкозы в сыворотке определяется по калибровочному графику.
Do'stlaringiz bilan baham: |
