Учебное пособие для студентов 1-2 курсов лечебного, педиатрического, стоматологического факультетов Новосибирск 2011 Под редакцией профессора В. И. Шарапова

Принцип метода: при добавлении кофеинового реактива к сыворотке весь билирубин переходит в диссоциированное состояние и дает розово-фиолетовое окрашивание с диазореактивом. Без добавления кофеинового реактива окрашивание с диазореактивом дает только холебилирубин. По интенсивности окраски определяют светопоглащение.
Ход работы:

Реактивы	Пробирка 1	Пробирка 2	Пробирка 3
	Общий билирубин	Холебилирубин	Контроль
Сыворотка крови	0,5мл	0,5мл	1,0 мл
Физ. раствор	-	1,75мл	0,5 мл
Кофеиновый реактив	1,75мл	-	3,5 мл
Диазосмесь 10 мл диазо 1 0,3 мл диазо 2	0,25мл	0,25мл

Для развития окраски общего билирубина пробу оставляют на 20 минут. Холебилирубин колориметрируют через 10-15 минут после добавления смеси. При более длительном стоянии в реакцию вступает гембилирубин. Обе пробирки колориметрируют против контроля в кюветах на 0,5 см с зеленым светофильтром. Количество гембилирубина определяют по разности общего и холебилирубина.
Норма: общий 4,2-20,5 мкМоль/л, холебилирубин 1,0-5,2мкМоль/л.
гембилирубин 3,2-15,4 мкМоль/л.


ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №20
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ТИТРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ПРИМЕНЕНИЕМ МУРЕКСИДА
Значение метода: Определение Са крови имеет большое значение (клиническое). Са определяют при рахите, при спазмофилии, при костных заболеваниях, при некоторых заболеваниях почек. При рахите также определяют коэффициент (Са/Р), в норме он равен 1,9-2 а при рахите увеличивается до 3 и более.
Принцип метода: мурексид образует с ионами Са в щелочной среде комплексное соединение, окрашенное в красно- фиолетовый или бледно-розовый цвет (в зависимости от концентрации). При титровании раствором более сильного комплексо-образователя трилона Б, этот комплекс разрушается, что приводит к изменению окраски, свойственной свободному мурексиду (бледно-сиреневой).
Ход работы: в стаканчик вносят 50 мл дистил. воды, 10 капель 9н р-ра NаОН и прибавляют несколько крупинок мурексида. Сразу появляется бледно-сиреневое окрашивание, обусловленное свободным мурексидом. Приблизительно половину раствора переливают в другой чистый стаканчик и эта часть служит эталоном окраски свободного мурексида. К оставшейся части р-ра добавляют 1мл сыворотки, что приводит к появлению бледно- розового окрашивания, обусловленного образованием кальциево-мурексидного комплекса. Раствор немедленно титруют трилоном Б до возращения прежней окраски индикатора. Конец титрования устанавливают путем сопоставления опытной и контрольных проб.
С тр.Б х V тр. Б 3,6мэкв/л Vтр Б
С Са= ----------------------------- = ---------------------

Vсыв 1мл

Vтр.Б- Обьем трилона Б, пошедший на титрование.