Учебное пособие для студентов 1-2 курсов лечебного, педиатрического, стоматологического факультетов Новосибирск 2011 Под редакцией профессора В. И. Шарапова

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №13

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ГАММА-ГЛЮТАМИЛ-ТРАНСПЕПТИДАЗЫ (ГГТП) СЫВОРОТКИ КРОВИ.

Значение метода: Фермент ГГТП локализован в мембранах клеток разных органов и служит для транспорта всех аминокислот внутрь клетки. При патологических процессах печени, сопровождающихся разрушением клеток, повышается активность фермента в плазме крови. Фермент мембранный, поэтому появляется в плазме рано. Повышение активности ГГТП в плазме наблюдается при алкоголизме, приеме опиатов. Снижение активности отмечается при приеме эфедриновых препаратов.
Принцип метода: Заключается в фотометрическом определении концентрации нитроанилина, который образуется при взаимодействии гамма-глютамил-нитроанилида с дипептидом глицил-глицилом под действием ГГТП.
Гамма-глютамил-нитроанилид+глицил-глицил------ гамма-глютамил-глицил-глицил+ нитроанилин
Активность ГГТП выражается в международных единицах Е/Л, означающих количество микромолей нитроанилина, образующегося под действием фермента, содержащегося в 1мл сыворотки за 1мин инкубации при 37 Градус С.
Ход процесса: В две пробирки наливают по 0,25 мл субстрата. В опытную пробирку добавляют 1мл сыворотки, а в контрольную 1мл физ. р-ра. Ставят на 15 мин инкубировать при 37 Град. Затем в обе пробирки наливают 2,7 мл уксусной кислоты, перемешивают и фотометрируют против контроля в кюветах толщиной 0,5см красным светофильтром.
НОРМА: Мужчины 15-106 Е/Л, женщины 10-66 Е/Л
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №14

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВИНЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.

Значение метода: Остаточный азот – азот небелковых соединений крови.
К остаточному азоту относится: мочевина, аминокислоты, креатин, креатинин, мочевая кислота,
гиппуроновая, аммиак.
1) Норма 14-28мм/л.
2) Увеличение уровня –Азотемия
1. Относительная ( обезвоживание)
2. Абсолютная:
а) ретенционная: ренальная (нарушение фильтрации); экстраренальная (снижение оттока мочи, снижение почечного кровотока вследствие шока, острой кровопотери).
б) продуктивная: подавление синтеза белка и усиление распада белка (лечение антибиотиками, сахарный диабет, гиперкортицизм, голодание)
2) Снижение уровня остаточного азота.
1. Относительное (введение больших количеств солевых растворов).
2. Абсолютное (понижение образования мочевины).
Принцип метода: мочевина при нагревании в кислой среде взаимодействует с диацетилмоноксимом и образует красный комплекс. Интенсивность окраски пропорционально концентрации мочевины в сыворотке крови.
Ход работы: в пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови. Добавляют 2мл диацетилмоноксима, перемешивают. Пробирку плотно закрывают ватой и нагревают 10 мин. в кипящей водяной бане. Охлаждают 2-3 мин и сразу фотометрируют, применяя зеленый светофильтр и кюветы на 0,3 мм. Контролем служит дистиллированая вода. Параллельно определяют оптическую плотность для стандартного раствора мочевины: 0,1 мл стандатного раствора мочевины, 2мл раствора диацетилмоноксима , перемешивают, кипятят 10 мин., охлаждают.
Концентрация мочевины в стандартном растворе (эталонном) 100мг% или 16,65 м моль /л.
Расчет: Х м моль /литр= А/Б 16,65 ; Х мг % = А/Б 100
Где А - оптическая плотность сыворотки крови,
Б - оптическая плотность стандартного раствора мочевины.

Содержание мочевины в сыворотке крови 20-40 мг% или 2,5-8,32 м моль /л.