Universum: химия и биология

Проведение скрининга эндофитных бактерий
по способности подавлять рост фитопатогенных 
грибов 
Бактериальные штаммы проверены in vitro на 
наличие антагонистической активности против фи-
топатогенных грибов F.oxysporum и F. solani. Грибы 
выращивали на агаризованной среде Чапека. 
Штаммы грибов выращивали на чашках с агаром при 
28°С в течение 5-7 суток. Диски агара с выросшей 
культурой гриба резали на квадратики (со стороной 
7-8 мм) и помещали в центр чашки Петри (9 см в 
диаметре). Бактерии, выращенные на твёрдой среде 
триптонно-соевый агар (TSA), пересевали на тесто-
вые чашки с той же средой перпендикулярно грибу. 
Чашки инкубировали при 28°С в течение 7 суток 
пока грибы не покрывали контрольные чашки без 
бактерий. Антифунгальную активность фиксировали 
и измеряли по ширине зоны ингибирования между 
грибом и исследуемыми бактериями.
Изучение ростостимулирующих свойств
эндофитных бактерий 
Продуцирование индол-3-уксусной кислоты 
(ИУК). Продуцирование ИУК было проверено со-
гласно методу Sarwar и Kremer [16]. Бактериальную 
суспензию доводили до концентрации 1 х 10
8
КОЕ/мл 
и добавляли в колбы с 10% TSA, дополненной 
5 ммоль/л-1 L-триптофана, и культивировали при 
29°С в течение 24 ч в темноте. Выращенные бакте-
рии центрифугировали при 8000×g в течение 15 мин 
и сливали надосадочную жидкость в свежие про-
бирки. Реактив Сальковского (смесь FeCl
3
- 0,5 моль/л 
и H
2
SO
4
- 7,9 моль/л) добавляли в соотношении 1:1 
(об/об) к надосадочной жидкости и оставляли при 

---

№ 5 (107)
май, 2023 г.
27 
комнатной температуре на 30 мин в темноте. Появ-
ление розовой окраски свидетельствует о продукции 
индол-3-уксусной кислоты. Для измерения ИУК 
использовали спектрофотометр при 530 нм. Для 
построения стандартной кривой использовали 
различные концентрации растворов ИУК. 
Способность эндофитов растворять неоргани-
ческий фосфат (фосфатмобилизация). Способность 
эндофитов к растворению неорганических фосфатов 
была определена согласно методу, описанному Mehta 
и Nautiyal [13]. Бактерии культивировали на плотной 
среде NBRIP (%): глюкоза - 1, Ca
3
(PO
4
)
2
- 0,5, MgCl
2
- 
0,5, (NH
4
)
2
SO
4
- 0,01, MgSO
4
,7H
2
O - 0,025, KCl - 0,02, 
агар - 1,5). Планшеты с бактериями инкубировали 
при 28°С в течение 96 часов. Образование колоний 
свидетельствовало о способности использовать не-
органический фосфат в виде Ca
3
(PO
4
)
2
в качестве 
единственного источника фосфата. 
Для проверки штаммов на азотфиксацию, колонии 
каждого эндофита высевали штрихом на твердую 
азотодефицитную малатную среду (г/л): CaCl
2
- 0,02, 
NaCl - 0,1, FeCl
3
- 0,01, KH
2
PO
4
- 0,4, K
2
HPO
4
- 0,5, 
MgSO
4
•
7H
2
O - 0,2, Na
2
MoO
4
•2H
2
O - 0,002, малат 
натрия - 5, агар - 15, pH 7,2-7,4) с добавлением дрож-
жевого экстракта 50 мг/л. Чашки Петри инкубировали 
при 29°С в течение 96 ч, появление роста свидетель-
ствовало о способности фиксировать N
2
. Новые 
выращенные одиночные колонии высевали штрихом 
на чашки с той же средой для подтверждения спо-
собности фиксировать азот [1]. 
Продуцирование 
1-аминоциклопропан-1-кар-
боксилата (AЦК) дезаминазы бактериями тестиро-
вали на основе использования ACC в качестве 
единственного источника азота. Эндофиты культиви-
ровали на среде Пептонный агар с добавлением 3,0 мМ 
1-аминоциклопропан-1-карбоксилата. Мы исполь-
зовали (NH
4
)
2
SO
4
в качестве положительного кон-
троля и без добавления источника азота в качестве 
отрицательного. Если бактерии росли, то это указы-
вало, что они продуцируют АЦК-деаминазу [4].