Материалы и методы
Выделение чистых культур эндофитных бакте-
рий из корней и стеблей сои
Для выделения эндофитных бактерий исполь-
зовали взрослое растение сою, взятое с одного из
сельскохозяйственных полей, на которых выращи-
вается соя.
Стебли и корень растений сои отрезали друг от
друга и разрезали на кусочки массой 15 г, стерили-
зовали, помещая в стаканы с 99,9%-ным этанолом
на 2 минуты и 10%-ным гипохлоритом натрия на
1 мин [14]. После этого их помещали в стаканы со
стерильной водой на 2 минуты. Кусочки побегов и
корней разрезали продольно на тонкие ломтики.
По 5 г каждого образца переносили в пробирки с
9 мл стерильной водопроводной воды для серийного
разведения (10
1
–10
5
). По 100 мкл суспензии из каж-
дого разведения переносили и наносили на триптонно-
соевый агар (TSA). Чашки инкубировали в термостате
при 29°С. Через четыре дня колонии, меняющие
цвет и форму, переносили и высевали штрихами
на чашки с триптонно-соевым агаром для очистки.
Чистые культуры использовали для выделения
ДНК. Мы также проверяли наружную поверхность
кусочков корня и побега на стерильность, помещая их
на среду TSA и инкубируя в течение четырех суток
при 29°С. После инкубации колоний на питательной
среде не было, что говорит о том что снаружи растения
были стерильны.
Проведение скрининга эндофитных бактерий
по способности стимулировать рост растений
Выделенные бактериальные эндофиты культи-
вировали отдельно в питательной среде в течение
96 ч при 29°С и доводили концентрацию клеток до
10
8
КОЕ/мл. Семена сои инокулировали бактериями
путем замачивания в бактериальной суспензии и
переносили в горшки со стерильной (автоклавиро-
ванной) почвой. Почву автоклавировали заранее при
2 атм в течение 1 часа. В качестве контроля исполь-
зовали стерильную питательную среду TSA. Длину
побегов и корней проверяли на 10-й день. Выявляли
лучшие ростостимулирующие бактериальные изо-
ляты.
Do'stlaringiz bilan baham: |