1. hujayralarni kullanish

Zamburug'lardan protoplastlarni olish

Taji (J. Giaja ) ishi bo'lib , u uzum salyangozining ovqat hazm qilish sharbati xamirturushning hujayra devorlarini eritishga qodir ekanligini ko'rsatdi. Kimyoviy tarkibni tahlil qilish fermentlarning butun majmuasi mavjudligini aniqladi: glyukanazalar , mannanalar , proteazlar , lipazlar, xitinazlar , poligalakturonazalar va boshqalar . Salyangoz sharbati ta'sirida birinchi xamirturush protoplastlarini L. Eddi va V. R. Uilyamson 1999 yilda olingan. 1957 yil.

Litik fermentlar hujayra devoriga ta'sir qilganda, teshik hosil bo'ladi , u orqali protoplazma atrof-muhitga kiradi va osmotik bosim stabilizatori ishtirokida, membrananing sirt tarangligi tufayli sharsimon shaklga ega bo'ladi - protoplast. shakllangan. Xamirturush hujayralarida teshik odatda hujayraning qutblaridan birida yoki ekvatorial zonada hosil bo'ladi.
glyukanazların qo'ziqorin hujayra devorlarining lizisinde asosiy rol o'ynashiga ishonishadi . Bu hodisada g'ayrioddiy narsa yo'q, chunki glyukanlar xamirturush hujayra devorlarining asosiy tarkibiy qismlaridan biridir. Shu bilan birga, kimyoviy tarkibi va tuzilishi jihatidan murakkab bo'lgan qo'ziqorin devorining tez va samarali lizisi boshqa fermentlarning mavjudligini ham talab qiladi litik kompleks . Bir nechta fermentlarning birgalikdagi ta'siri bilan sinergik ta'sir namoyon bo'ladi.
Litik kompleks Streptomyces qo'ziqorin protoplastlarini olish uchun keng va muvaffaqiyatli qo'llaniladi . spp . va boshqalar. Mikrob kelib chiqadigan fermentlar yordamida hujayra devorlarini lizis qilish uchun yoki kultura suyuqligi inkubatsiyadan keyin ishlatiladi. mikroorganizm , yoki ammoniy sulfat yoki aseton bilan fermentlar majmuasini cho'ktirish natijasida olingan ferment preparati. Foydalanishdan oldin ferment aralashmasiga osmotik bosim stabilizatori qo'shiladi va membrana filtri orqali filtrlash orqali sterilizatsiya qilinadi. Litik kompleks ta'sirida hujayra devorlarining erishi jarayoni bir necha soatdan 2 kungacha davom etishi mumkin.
Protoplastlarning shakllanishiga, ayniqsa zamburug'lar va xamirturushlarda, kulturaning yoshi kuchli ta'sir ko'rsatadi. Shuning uchun, yosh xamirturush hujayralari va miselyumdan foydalanish tavsiya etiladi. Ko'pgina mualliflarning fikriga ko'ra, qo'ziqorin hujayralarining litik fermentlar ta'siriga yoshga bog'liq har xil sezuvchanligi sifatli emas, balki hujayra devoridagi miqdoriy o'zgarishlar bilan bog'liq .

merkaptoetanol , sistein- HCl , natriy sulfid) ta'siridan foydalanish mumkin. Ularning hujayralarga ta'sir qilish mexanizmi to'liq aniqlanmagan bo'lsa-da, bu birikmalar mannan -oqsil sirt qatlamidagi disulfid bog'larini buzadi va shu bilan glyukan matritsasining litik fermentlar ta'siriga kirishini osonlashtiradi .

hujayralarni xelatlovchi birikmalar ( Na-EDTA ) bilan davolash yoki muzlatish-eritish kabi usullardan foydalanish orqali ham osonlashtirish mumkin . Eng yaxshi osmotik bosim stabilizatorlari 1 M natriy xlorid eritmasi va 1 M natriy xlorid eritmasining 1 M mannitol eritmasi bilan 1: 1 nisbatda aralashmasi edi.
Kultivatsiya davrida protoplastlar va sferoplastlar hajmini, ba'zan hatto uchdan biriga ko'paytirishga va bo'linishga qodir . Protoplastlarning boʻlinishi oʻlchami boʻyicha ham, oʻlchami boʻyicha ham teng boʻlmagan, kurtaklanish shaklida boʻlishi mumkin . Qiz protoplastlar odatda kichikroq bo'ladi. Mikrob hujayralaridan olingan protoplastlar o'zlarining ko'pgina xususiyatlarini saqlab qoladilar . Ular muhitning ozmotik bosimi va protoplast tarkibining yaqin qiymatlarida izotonik ozuqa muhitida yashovchan bo'lib, turli moddalarni metabollash va ishlab chiqarishga qodir, bakteriofaglarning rivojlanishini qo'llab-quvvatlaydi, o'sadi va bo'linadi . Konvertning yo'qligi mikroorganizmlarning kesishmasligi uchun muhim to'siqlardan birini yo'q qiladi, mikroorganizmlarning uzoq shakllarida ham gibrid nasl olish uchun genomlar va sitoplazmani birlashtirish imkoniyatini yaratadi.