Аффин хромотографияси

1-расм Икки субстратли тартибсиз мезанизм



2-расм Икки субстратли тартибсиз механизм


Бу ерда E-фермент, аА, B, P ва Q-реагентлар ёки махсулотлар.

Одам эритроцитларидан олинган глюкозафосфат дигидрогеназанинг аффин xромотографияси келтирилган. NADDH билан боғланган фермент агарозада самарали сорбцияланади, унга эса ўз навбатида дигидрозид адинин кислота кислотаси орқали NADP бириктирилган. Фермент NADP ёрдамида эллюгерловчи буфер эритмасига колонкадан специфик тарзда иллюгирланган.

Кўрсатиб ўтилган кофермент аффинли xромотографияда кенг тарқалган кофермент ҳисобланади. Аденин, уридин, гуанин ва фловин нуклеотидлари, лиридоксал, фолат коферментлари ва уларнинг аналоглари, биотин, липоат кислота кобалашинлар ва порфирген хосилалари тез-тез қўлланиладиган аффин лигандлар ҳисобланади. Мисол тариқасида N⁶-(6-аминогексил)-5¹АМD- сефарозасидаги BaciMus stearothermophilus нинг қисман тазаланган экстрактидан ажратиб олинган алкоголъдегидрогеназа ва фосфофруктокеназанинг аффин xроматографияси бўйича маълумотлар келтирилган.

NADP-агроза билан тўлдирилган колонкадаги, NADPX боғланган глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа грамотографияси.

Ферментлар 5мМ NaOH (алкоголъдегидрогеназа учун) ёки 5мМ ATP-Mg²⁺ (фруктокеназа учун) нинг катта миқдорини киритиш билан, хамда KCl консентрация градиенти) ва pH градиенти билан иллюгерланади.

Специфик сорбентни олиш учун аллостерик эффектлар сифатида, сефароза билан боғланган.
Специфик сарбентни олиш учун аллостерик еффектор сифатида, сефароза Билан богланган d АТР нинг п- аминофенилли мисол килб келтиришимиз мумкин. У Ти рибонуклиотид редуктазани ажратиб олиш учун кулланган(5). Escherichia coli дан АДР- глюкозолирофосфолиразани ажратидб олиш учун хуген ва бошка халастирик фаоллантирувчига ухшаш булган p –(6 –фосфор -1-гексил) –p-( 6-амино -1-гексил)- пирофасфатга бириктирилган сефаразодга аффин хроматографгини кулланган.
N –(6-аминогексил)-5 AMP-сефароза билан алькагол дигидрогеноза ва фосфоредуктагенозанинг специфик элюирланиши.
Ташувчи бирикмаларни антитилаларни куллаш ёрдамида ферментларни ажратишга мисол килиб шу оксилга бир зумда боғланган антителаларнинг сефарозага ишкори фосфотозанинг аффинил хроматографиясини курсатишимиз мумкин.
Эркин SH –гурухларга эга булган сорбентда ферментларнинг ажратиш 6.6 булимда куриб чикилган.
Ингибитор ва кафакторларни ажратиш учун аффин мигантлари сифатида купинча богланган ферментлар кулланилади.
модификацияланган сефарозага ухшам хроматрофия билан химатрипсин бириктирилган соферозада картошканинг ингибиторини ажратиш буйича малумотлар солиштирилган. Модификацияланмаган сиферондаги хроматография, эритмайдиган ташувчида ноцпесифик сорбцияланган материялни шундай экиспериментлар питритларида элюацияга учрамаслигини назарда тутиш учун утказилади(56).
Агарда ингибитор ички кисмларида гликазил гурухларини тутса, у холда уни ажратиш учун конканавлин А ни куллаш мумкин.мисол сифатида конканавлин А биоан бириктирилган сефарозадаги, одам кон зардобидан антитриписинни ажратишни курсатишимиз мумкин. Альбумин бириктирилган антитаналар билан сеферазодаги иммунасорбция қилинган альбумин асосида ифлосланган маҳсулотни олиб ташлаш йули асосида одам ва сичкон қони зардобини тоза махсулотини олтишга мувофик бўлишди.