Аффин хромотографияси

Иммуноаффин хроматаграфия

Антителаларни уларнинг антигенлари билан узаро таъсирни спецификлиги буйича субстратларни ферментлар билан боғланиши Билан таккослаш мумкин. Одатта комплекисларнинг диссоциатция константалари 10.5 – 10.8- молъ-л оралиғида бўлади (39). Атителаларни ажратиш учун антиген ва гаптненлардан (окси лёки синтетик полппентидларга бириктирилгандан сунг имуноагент сифатида намоён булувчи кимёвий молфикацияланган гурухлар) фойдаланилади, антителалар эса уларга Карши олингандир. Маълум антигенлар Билан рагбадлантирилган антителалар сезиларли даражада геторогенлигига Билан характерланади. Оддий маълум бир кимёвий гаптенларни куллашда шундай гидрогенлик учун қуйидагилар сабаб булиши мумкин.

1. 
   гаптенлар ташувчи- малекуланинг турли кисмларига бириктирилган бўлиб ва шунинг сабабли турли хил микро муҳитга эга бўлади.
   

Бундай ҳолат агарда оксил ташувчилар боғланиши рияолларга кириша олиши кобилиятига эга булган ягона аминокислота ёки бир турдаги амина кислота тутган синтетик полипигмент кулланилганда кузатилмайди.

2. 
   гаптен антиген моликуласининг юзасига нисбатан турли усуллар Билан организацияланган булиши мумкин.
   
3. 
   антителалр гаптен маликулалариниг рурлари кисимлари йуналтирилагн булиши мумкин. Оксилларга Карши йуналтирилган антителалри вазиат янада мураккабдир чунки оксил хам тулик аникланмаган турли антиген гурухларни тутади. Бундан ташкари зардоб антителалари фаоллигига эга булган бир нечта синор оксилларини тутади.
   

Антителалрни боғлаш сохаларини гетирогенлигига, антиген- антитела комбинацияси учун дисоцияси канстанталарини тулашга олиб келади. Эримайдиган ташувчига антиген имобилизацияси килишда специфик имуносарбент хосил булади, ва у куйдаги хусусиятларга эга булиши керак.

1. 
   кампанент аралашмаларидан кампилиментлар антителани адсорбциядаги кобилияти
   
2. 
   антителаларнинг специфик фаоллигига зарар етказадиган шароитда специфик сорбен Билан бирга адсорбцияланган антителани комплексдан ажратиш кобилиятига эга
   
3. 
   специфик антителалар буйича юкори адсорбцияни сиғимига эга булиши.
   
4. 
   сакланганда ва кайта ишлангандан сунг узининг биологик фаоллигини саклаб колиши керак.
   
5. 
   центрифугани, филтерлаш ва калонкани тулдиришга имоно берувчи механик хусусиятларига керак.
   

Ушбу талабални колдириш нафакат боғланиш антителанинг микдори ва сифатига боғлик, Билан эргимас ташувчининг ва хосил булган боғнинг табиатига бажарилади.
Агарда антителарлани ажратиш жараёнида глюкагон уланган сефарозадаги глюкагонга (39) паст титирли ( 200-300) зарбда калонкага киритилси. У холда фаол антителалар, градентда ёки бир боскичда OH и сувли омиллни Билан 11 га етказилган натриларни 0,15 м ли эритмаси Билан илюирланганн носпесифик сорбентларнинг оқсиллардан тулик ажратиш факатгина сунги холатда кузатилади.антизарбдиниг метри 700 булса у холда антителаларни калонкалардан ажратиш ундан калонканинг 30 хажмига тенг булган pН 11 булган 0,15 М NаCL ни утказилгандан сўнг амалга ошади. Агарда антизарбнинг титри 1000 бўлса у холда антителалрни натри хлони 0,15H ли эритмасининг 100-карра ортик микдори(pН11) элюирлар бўлмайди, ва антителалар калонкалардан pН и чумоли кислата Билан 2,2 етказилган 0.1N сирка кислотани ўтказгандан сўнг эритувчи Билан бирга чикади. Бирок, кулланилаётган антизардобнинг титри 1400- 9000 оралиғида бўлган бўлса, у холда 0.1 М сирка кислотанинг 1- кара ортик хажми хам (pH2.2) антителаларни калонкадан чикара олмайди. Антителалар факат 4М гуанидинхлорид Билан элюирланади ( эриди). Ушбу натижалар иммунизация дастуриниг турли дастурларидаги бир хайвонинг антителасидан олинган худи шунга ўхшаш натижалар турли куёнлар антителалари Билан хам киритилган.
Антигенларни ажратиш учун имобилланган антителаларни кўллаш мумкин. Антигенлар турли турдаги моддаларга тегишли булиши мумкин. Шунинг учун антителалар жуда кўпгина бирикмаларни ажратиш учун аффин лигандлар сифатида кўрсатилган.
мисол сифатида мос келувчи антителалар бириктирилган сефарозадаги одам глйюкайитлари интерфсрунларини ажратиш кўрсатилган (2). Интерферонлар 25000 моликуляр массага эга бўлган гуликапронинлар хисобланиб, кенг сектордаги вирусларга хос. Антивирус фаолликка эгадир. Имобилланган антителалар хужайраларни ажратищда хам мухум урин тутади. Химмуносорбэнтлар нафакат ажратиш учун балки структур фаркларни аниклашда, масалан митахондрял дигидрогенозаларни орасидаги фаркларни аниклашда кулланилади.