Аффин хромотографияси

q_i=R₁R₂Ci
1+R₁Ci
бу ерда, q_i - i моддданинг адсорбцияланган улуши, Ci- сорбцияланмаган i модданинг концентрацияси, R₁ ва R₂ лар константалар. Ci нинг паст консентрацияларида тенглама q_i =R₁R₂Ci холатига ўтади. Ci нинг юқори концентрацияларида эса q_i =R₂ холатида бўлади. Умумий холарда қуйидагича бўлади.
g_i=ƒ(Ci)ⁿ

бу ерда, 0≤n≤1, бундан шу нарса келиб чиқадики, агарда лиганднинг концентрацияси етарлича юқори бўлса, у холда сорбент сиғими лимитловчи омил хисобланмайди. Адсорбцияланган модда i нинг q_i улуши унинг бириккан аффин лиганднинг ўxшашлигига эмас, балки Ci ҳаракатчан фазадаги концентрациясига боғлиқдир. 4та ферментнинг эквимоляр миқдорини тутган намуналар учун ҳар бир адсорбцияланган фермент улуши- q₁, q₂, q₃ ва q₄ . D-концентрацияли сорбцияловчи конкурент элюент ёрдамида сиқиб чиқарувчи xроматографияда 1,2 ва 3 ферментларни элюгерлашда уларнинг элюатдаги концентрацияси C₁,C₂,C₃ га тенг бўлади.

4 фермент элюатда сиқиб чиқарувчи конкурентли сорбцияловчи элюент сифатида чиқиши олдидан пайдо бўлади. чунки унинг адсорбция кучи ушбу элюентнинг концентрациясига унчалик боғлиқ эмас. Шу сабабли ферментнинг аффинлиги >10-3 мол/л диссоцияси канстантаси билан баxоланади.

R₁ R₂ С, С_i нинг юқори концентрацияларида эса q_i = R₂ i xолатида бўлади ва умумий холатда қуйидагича ифодаланади:

q_i =f(Ci)n ;
бу ерда 0 ≤ n ≤ 1. Бундан шу нарса келиб чиқадики лигaнднинг концентрацияси етарлича юқори бўлса q ҳолда сорбент йиғими лимитловчи xисобланмайди.
Адсорбцияланган модда i ги улуши, унинг бриккан аффин лиганднинг ўxшашлигига эмас, балки Ci ҳаракатга канцентрацияга боғлиқдир. 4 ферментнинг эквимоляр миқдорини тутган намуналар учун, ҳар бир адсорбцияланган фермент улуши - q₁,q₂,q₃ ва q₄. D канцентратцияни сорбсияловчи рақобатли элюент ёрдамида xроматографияда 1,2, ва 3 ферментларини элюирпашда , уларнинг элюатдаги канцентрацияси C₁,C₂ ва C₃ га тенг бўлганди. 4- фермент элюент сиқиб чиқарувчи компонент сорбсияловчи элюент ҳисобланади.
Юқори кимёвий ўxшашликка эга бўлган фермент кучсиз боғланувчи ферментни айириб чиқармайди , бу ҳолат сорбциянинг бошланишидан сўнг юқори кимёйий ўxшашликка эга бўлган ферментни қўшишни давом эттирганда ҳам ўзгармайди. қачонки сорбент xажми ошиб кетса , у ҳолда калонка ҳажмидаги элюатда юқори ва паст аффинли ферментлар пайдо бўлади. Буни асосан, умумий лигандларга ўxшашлик бўлган лигандларни бўлиш вақтида ёдда тутиш керак.
Баъзида специфик сорбентлардаги адсорбциядан олдин, оқсил - аралашмаларидан фракциялаш йўли билан қутилиш зарурдир. Агарда pH, ион кучи, ҳаракат оқиш тизими ва диэлектрик ўтказувчанлиги каби адсорбция шароитларини ўзгартирса, у холда баъзи ферментларни олиб ташлашимиз мумкин.
Бундан ташқари , улардан баъзи бирларини адсорбциясини олдини олиш мақсадида, эритмага ингибитор ёки бошқа лигандларни қўшиш мумкин. кичик ўлчамли паралари бор ташувчиларни қўллаш орқали юқори малекуляр массали оқсиларни олиб ташлаш мумкин. Специфик ингибиторлар ёки субстратлар индивидуал ферментларни танлаб илюирлашда фойдаланиш мумкин. Гуруҳли спецификликка эга бўлган сарбентларда олиб бориладиган фермент арашмаларини ажратишга доир мисоллар келтирилган. Индивидуал модаларни ажратиш учун пХ ион кучи ва ҳарорат градиентларидан фойдаланилади.
Аффин лигандларни хусусиятига эримайдиган ташувчининг табиати ҳам тасир этади. Этилен ва аминокислатанинг манфий қутубланган сополимерига бириккан протеолитик ферментларга, фақатгина изоэлектрик нуқтаси <4-5 бўлган ингибиторларгина сорбцияланади. Агарда сополимер занжирининг манфий зарядини гексаметилиндиамин ва диметилендиамин билан нейтралланса, у xолда ҳосил бўлган полиамфотер ҳосила изоэлектирик нуқтси паст бўлган ингибиторни ажратиш учун ҳам яроқли бўлиб қолади.