Фармамакологик биокимё

Машғулот N40.
Анилиннинг оксидланишли Р-гидроксилланиш реакциясини ырганиш.
Услуб асоси. Анилиннинг гидроксилланиш реакцияси цитохром Р
450
ни
НАДФ
.
Н ва кислород иштрокида Р-аминофенол хосил былишига асосланган
Р-аминол Na
2
CO
3
ёрдамида фенол билан ызаро реакцияга киришиб кык
рангли индефенол комплекси щосил =илади.
Жихозлар. Спектрофотометр, лаборатория центрифугаси, термометрли сув
хаммоми, торзион тарозиси, пробиркалар, пипеткалар.
Реактивлар.
1.
0,4м трис-HCl буфери, рН-7,3
2.
0,16м магний хлор эритмаси.
3.
0,03м НАДФ
.
Н эритмаси
4.
0,03м анилин эритмаси
5.
15% учхлорсирка кислотаси эритмаси
6.
натрий карбонатнинг тыйинган эритмаси
7.
2% фенолни 0,2м натрий гидроксидаги эритмаси. Бунинг учун 2г ыйувчи
натрийни 250мл дистилланган сувда эритилади, сынгра 5г фенолни шу
эритмани 245мл да эритилади.
Ишнинг бажарилиши. Инкубацион аралашма таркибида 2мг микросомал
фракция о=сили , 0,1мл 0,4м трис-HCl буфери, рН-7,3, 0,1мл 0,16м магний
хлор эритмаси, 0,1мл 0,03м НАДФ
.
Н эритмаси ва 0,1мл 0,03м анилин
былган 1мл хажмда тайёрланади ва 37
0
С да 20минут, аралаштирилиб турган
холда, инкубация =илинади. Реакцияни 0,5м учхлорсирка кислотаси =ышиб
тыхтатилади ва 10 минут давомида 3500 g центрифугаланиб, супернатантдан

---

1мл олинади ва устига 0,5мл натрий карбонатнинг тыйинган эритмаси, 1,5мл
0,2н NaOH даги фенолни 2% эритмасидан =ышилади. Шундан кейин ранг
щосил былиши учун намунани 30 минутга 37
0
С сув хаммомига
жойлаштирилади ва рангли комплекс ми=дорини СФ да 630нм да ылчанади.
Гидроксилланишдан щосил былган унум ми=дорини калибрланган эгри
чизи= (N-аминофенолни стандарт эритмаси асосида тузилган) ёки
экстинкция моляр коэффиценти (6,7
.
10
3
ое/моль.см) быйича ани=ланади .
Анилиннинг 
каламуш 
жигари 
микросомасидаги 
Р-гидроксилланиш
реакцияси тезлиги 0,6-0,8нмол/мин/мг о=силга ты\ри келади.
Щисоблаш. Анилиннинг Р-гидроксилланиш реакция тезлиги амидопиринни
N-деметилланишида келтирилган формула быйича хисобланади. Хисоблашда
N-аминофенолни моляр экстинкция коэффицентидан Е= 7
.
10
3
ое/моль.см
(Строев Е.А. практикум побиохимии, 1986, 191 бет) фойдаланилади.