Фармамакологик биокимё

Жихозлар. Спектрофотометр,лаборатория центрифугаси, сув щаммоми,
торзион тарози, пробиркалар, пипеткалар.
Реактивлар. 1. 0,4м трис-HCl буфери, рН-7,6(12,1 г трис-оксиметил-
аминометанни 100 мл дистилланган сувда эритилади ва концентрланган
хлорид кислота билан рН-7,6 га етказилади, эритма щажми дистилланган
сувда 250 мл гача тылдирилиб, фильтрланади.)
2.
0,16 м магний хлор эритмаси
3.
0,03 м НАДФ.Н эритмаси
4.
0,08 м амидопирин эритмаси
5.
25% цинк сульфат эритмаси
6.
Барий гидроксиди-тыйинган эритмаси.
7.
Наш (Nash) реактиви (таркибида бир хил ми=дорда 2 м аммоний ацетат,
0,05м музлаган сирка кислотаси ва 0,02 м ацетилацетон эритмаси са=лаган)
Ишнинг бажарилиши.
1 мл хажмдаги инкубацион эритма таркибида: 1,5 мг микросомал фракция
о=сили (микросома ажратиш ю=орида келтирилган), 0,1 мл трис-HCl буфери
(рН-7,6), 0,1мл 0,16 м магний хлор эритмаси, 0,1 мл 0,03 м НАДФ.Н эритмаси
ва 0,1 мл 0,08 м амидопирин эритмаси. Текширилувчи ва назорат (таркибида
НАДФ.Н тутмаган) намуналари 20 мин. давомида, муттасил аралаштирилиб
турган щолда, 37
0
С инкубация =илинади. Реакция бир хил хажмда
=
ышилган 25% ZnSO
4
эритмаси ва тыйинган Ва(ОН)
2
эритмаси
аралашмасидан 0,75мл =уйилиб, тыхтатилади. Намуналар таркибидаги
о=силни чыктириш учун уларни 10 мин давомида 3500g центрифугаланади.
Сынгра супернатантдаги формальдегид ми=дори Наш реакцияси быйича
ани=ланади . Бунинг учун чыкма усти сую=лигидан 1мл олиниб, устига 4мл
Наш реактиви =ышилади ва намуналар 45 минут давомида 37
0
С инкубация
=илинади . Формальдегид ми=дори СФ да 412нм да ани=ланади . Хосил
былган формальдегид ми=дорини ылчашда калибрланган эгри чизи\идан
(формальдегидни стандарт эритмаси ёрдамида тузилган) ёки экстинкция
коэффицентидан (8-10 оптик бирлик ое/моль. см) фойдаланилади. Каламуш
жигари микросомаларида амидопириннинг N-деметилланиш реакция тезлиги
4-6нмол/мин/1мг о=силга тенг.
Щисоблаш.
Амидопириннинг N-деметилланиш реакцияси тезлигини
хисоблашда формальдегидни экстинкция коэффицентидан
Е= 8
.
10
3
ое /моль. см. фойдаланилади.

---

1мг микросомал о=силни (нмоль) 1минутдаги реакция тезлиги А-
А=
D
бунда
E
· B · t
D-текширилувчи намунани оптик зичлиги
E-моляр экстинкция коэффиценти
t-инкубация ва=ти
B-текширилувчи намунадаги о=сил ми=дори (мг)