Фармамакологик биокимё

Ишнинг бажарилиши. Аввало экспериментга олинадиган хайвонларни 20
соат оч =олдирилади, о=ибатда жигарда гликоген ми=дорини камайиши
щисобига микросомаларни центрифугалаганда 30-40% йы=олишини олди
олинади. Зардобда эритроцитларнинг парчаланган былаклари былмаслиги
учун жигар совутилган 1,15% калий хлор эритмаси билан дарвоза венаси (V.
porte) ор=али перфузия =илиб, ювилади. Сынгра 2г жигардан олиниб =айчи
билан майдаланилади ва 1,2 минут давомида 1,15% калий хлор эритмасининг
6мл да гомогенизация =илинади. Ишнинг сову= хонада
(-4
0
) совутилган эритмалар билан бажарилади. Центрифугалаш учун бош=а
центрифугаларни ишлатиш мумкин. Биринчи навбатда гомогенатдан ядро
фракциясини (10-15 минут 1000 g центрифугалаб) ажратиб олинади, сынгра
чыкма устки сую=лигидан (15 минут 14000 g центрифугалаб) митохондрия
ва бош=а фракциялар ажратилади. Шундан кейин чыкма усти сую=лиги яна
центрифугаланиб (105000 g 60 минут), устки =авати асталик билан олинади.
0,1мл иш=орли фосфат буферида 1:2,5 нисбатида суюлтирилади. Олинган
микросомал суспензиясида о=сил ми=дорини ани=лаб (Лоури усули билан)
бош=а ма=садли ишларда фойдаланилади.
Машғулот №39 Микросома монооксигеназа системаси ферментлари
фаоллигини ани=лаш
Ксенобиотиклар биотрансформациясининг монооксигеназ системаси щар
щил реакцияларни катализлайди. Хусусиятига =араб, бу ферментатив
реакция номлари адабиётда турли номлар билан аталади: диметиланилин N-
деметилаза; нитрозо-диметиламин N-деметилаза; анилин Р-гидроксилаза в.б.
Шундай деб аталса щам бу реакцияларни хар щил ферментлар катализламай,
балки бир система томонидан амалга оширилади. Жигар микросомал
гидроксилловчи системаси учта таркибий =исмдан иборат:
НАДФ,Н-цитохром Р-450-редуктаза (КФ 1.6.2.4.), цитохром р-450(КФ
1.14.14.1)ва 
фосфопротеидлардан. Бундан 
таш=
ари 
микросомал
монооксигеназа комплекснинг функциясида цитохром В
5
ва НАД.Н-
цитохром В
5
-редуктазани (КФ 1.6.2.2.) катта ахамияти бор. Демак,
аминопириннинг N-деметилазаси ёки анилиннинг Р-гидроксилазаси
фаоллиги ты\рисида фикр юритилганда гап иккита фермент ща=ида эмас ,
балки битта фермент системаси фаоллигини иккита субстратга нисбатан
эканлигида боради. +уйида монооксигеназа системаси фаоллигини щар хил
кимёвий структурадаги субстратлар билан ани=лаш услублари келтирилган.
Услуб асоси. Жигар микросомаси монооксигеназа системаси фаоллигини
кырсатгичи сифатида амидопиринни диметилланишини келтириш мумкин.
(1-фенил-2,3-диметил-4-диметиламинопиразолон-5). Диметилланиш тезлиги
щосил былган формальдегид ми=дори билан ани=ланади . Реакция НАДФ.Н

---

ва кислород иштирокида микросоманинг цитохром Р-450 ёрдамида амалга
оширилади.