Конспект подготовлен студентами, не проходил проф. Редактуру и может содержать ошибки. Следите за обновлениями на vk. Com/teachinmsu


Лекция 9. Ионообменная хроматография


Download 1.77 Mb.
Pdf ko'rish
bet26/42
Sana20.06.2023
Hajmi1.77 Mb.
#1633785
TuriКонспект
1   ...   22   23   24   25   26   27   28   29   ...   42
Bog'liq
enzymology-M

Лекция 9. Ионообменная хроматография. 
Группы ионов, которые участвуют в процессе.
Катионные обменники и анионные обменники. 
Используют 3 типа анионов, которые привязываются к матрице: 
• 
Карбоксильные группы (самые слабые, пришиваются к любой матрице)
• 
Сульфо группы (присоединяется за счет эфирной связи)
• 
Фосфатная группа (присоединяется чаще к целлюлозе)
Рисунок 14. Пример анионного обмена 
Катионы: 
• DEAE 
(слабое основание, работает при низком рН)
• 
Этильные радикалы (три группы этанола, QEAE) 


КОНСПЕКТ ПОДГОТОВЛЕН СТУДЕНТАМИ, НЕ ПРОХОДИЛ 
ПРОФ РЕДАКТУРУ И МОЖЕТ СОДЕРЖАТЬ ОШИБКИ 
СЛЕДИТЕ ЗА ОБНОВЛЕНИЯМИ НА VK.COM/TEACHINMSU 
ОСНОВЫ ЭНЗИМОЛОГИИ. 
АСЕЕВ ВИКТОР ВАСИЛЬЕВИЧ 
38 
Рисунок 15. Пример катионного обмена 
Условия разделения.
Условия активности ферментов необходимо соблюдать. Очень важен выбор буферной 
системы должен учитывать природу обменников, катион-анион, анион-катион.
Две формы проведения:  
• 
Хроматография в объеме
• 
Колоночная, иногда гибрид
В емкость помещают разделяемые белки, размешивают с раствором носителя, достигая 
полного связывания. Далее проводят центрифугирование, и затем так повторяют до 
предельной чистоты.
Хроматография – 
непрерывный процесс перераспределения.
Процесс элюции. 
Для разделения близким по своим хроматографическим свойствам веществ используют 
изократическую элюцию – раствором неизменного состава. Это вариант элюции дает 
наилучшее разрешение пиков. 
Элюцию ступенчатым или непрерывным градиентом осуществляют чаще всего за счет 
изменения концентрации соли в буфере неизменного состава.


КОНСПЕКТ ПОДГОТОВЛЕН СТУДЕНТАМИ, НЕ ПРОХОДИЛ 
ПРОФ РЕДАКТУРУ И МОЖЕТ СОДЕРЖАТЬ ОШИБКИ 
СЛЕДИТЕ ЗА ОБНОВЛЕНИЯМИ НА VK.COM/TEACHINMSU 
ОСНОВЫ ЭНЗИМОЛОГИИ. 
АСЕЕВ ВИКТОР ВАСИЛЬЕВИЧ 
39 
Изменение рН буфера используют, как правило, для ступенчатого градиента с целью 
нейтрализации, а иногда и изменения знака заряда компонентов фракционируемой 
смеси или нейтрализации самого обменника.
Условия посадки препарата на колонку при градиентной элюции обычно бывают 
таковы, что он концентрируется в верхней части колонки. 

Download 1.77 Mb.

Do'stlaringiz bilan baham:
1   ...   22   23   24   25   26   27   28   29   ...   42




Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling