Конспект подготовлен студентами, не проходил проф. Редактуру и может содержать ошибки. Следите за обновлениями на vk. Com/teachinmsu

 
 

---

КОНСПЕКТ ПОДГОТОВЛЕН СТУДЕНТАМИ, НЕ ПРОХОДИЛ 
ПРОФ РЕДАКТУРУ И МОЖЕТ СОДЕРЖАТЬ ОШИБКИ 
СЛЕДИТЕ ЗА ОБНОВЛЕНИЯМИ НА VK.COM/TEACHINMSU 
ОСНОВЫ ЭНЗИМОЛОГИИ. 
АСЕЕВ ВИКТОР ВАСИЛЬЕВИЧ 
34 
Лекция 8. Методы очистки ферментов. 
Получение белков в чистом виде.
Есть несколько уровней задач. Если в исследовании важна именно структура, то 
используют именно чистый белок. Если преследуются цели для технического 
использования и изучения кинетических свойств, то примеси очищаются не полностью.
Два класса примесей:
• 
Небелковые примеси. Характерна относительная простота удаления за счет различия в 
структурном строении и свойствах
• 
Белковые примеси 
После получения первичного гомогената, удаляем примеси, желательно как можно 
быстрее.
Удаление низкомолекулярных примесей осуществляется путем 
диализа (очистка 
коллоидных растворов и субстанций высокомолекулярных веществ от растворённых в 
них низкомолекулярных соединений при помощи полупроницаемой мембраны).
Процесс достаточно медленный, требуется много растворителя, чем больше, тем 
лучше. Иногда делают ступенчатым.
Капиллярный диализ. То же самое, только еще мельче, а следовательно, и 
увеличивается чувствительность метода. Внешнее пространство – раствор, внутреннее 
– 
гомогенат.
Минусы: 
• 
Полностью очистить нельзя, но уровень все равно низок
• 
Процесс медленный
Плюсы: 
• 
Объемы большие 
Иногда примеси не удаляют, а попросту 
осаждают белок. Однако, при удалении воды 
возможно слипание белков и димеризация, тем самым образуется белковый осадок.
Высаливание.
Принцип: 
В белковый раствор добавляют высокие концентрации ионов, которые вызывают 
слипание белков при связывании воды. Соль должна быть растворимой и не должна 

---

КОНСПЕКТ ПОДГОТОВЛЕН СТУДЕНТАМИ, НЕ ПРОХОДИЛ 
ПРОФ РЕДАКТУРУ И МОЖЕТ СОДЕРЖАТЬ ОШИБКИ 
СЛЕДИТЕ ЗА ОБНОВЛЕНИЯМИ НА VK.COM/TEACHINMSU 
ОСНОВЫ ЭНЗИМОЛОГИИ. 
АСЕЕВ ВИКТОР ВАСИЛЬЕВИЧ 
35 
влиять на белок. Никаких солей тяжелых металлов, никаких 
восстановителей/окислителей, никаких фосфатов и так далее.
Хорошей солью может стать сульфат аммония. Экстракт разделяют на порции и 
разливают в пробирки, затем в каждую добавляют сульфат аммония в соотношениях в 
процентах от насыщенного. Далее берут либо раствор, либо осадок. Сначала 
активности нулевые, потом активность постепенно поднимается. В итоге мы получим 
диаграмму осаждения при разных концентрациях. Далее растворы отсортировывают по 
концентрациям.
Иногда белок осаждается раньше.
Мы иногда сталкиваемся с такой проблемой, как гидролиз и сдвиг рН в кислую 
сторону. В таких случаях заранее контролируют рН при добавлении и впоследствии 
оттитровывают. Либо сразу завышают/занижают рН до добавления, дабы создать нечто 
вроде дополнительного страхования. 
Такая эффективность невысокая.