M. G. Safin,D. G‘. Hayitov, yu. S. Ruziyev
Download 2.82 Mb. Pdf ko'rish
|
- Bu sahifa navigatsiya:
- 1-tajriba. Erkin bilirubinga oid rangli reaksiya Ishni bajarish tartibi . A ) Erkin bilirubinni aniqlash
- B) Bog‘langan bilirubinni aniqlash
- 2-tajriba. Yendrashek va Kleggori usulida qon zardobi tarkibidagi bilirubin miqdorini aniqlash Ishni bajarish tartibi
|
Kerakli reaktivlar: ksilol, benzidinning 5 % li eritmasi, vodorod
peroksidining 3% li eritmasi, distillangan suv, diazoreaktiv ( tayyorlash: a) 5 g sulfanil kislota 300-400 ml distillangan suvda biroz qizdirish yo‘li bilan eritiladi, ustiga 15 ml konsentrlangan xlorid kislota qo‘shiladi va hajmi 1 l ga yetkaziladi, bu Diazoreaktiv-I; b) natriy nitratning 0,5%li eritmasi, bu Diazoreaktiv-II. Reaksiyani amalga oshirish uchun 10 ml diazoreaktiv I ni 0,3 ml diazoreaktiv-II bilan aralashtiriladi), etil spirti, kofein reaktivi (tayyorlash: 5 g toza kofein, 7,5 g natriy benzoat, 70 ml distillangan suvda haroratni 80 o C gacha qizdirish yo‘li bilan eritiladi, so‘ng aralashmani hajmi 100 ml ga yetkaziladi),bikarbonatning spirtli eritmasi(tayyorlash: 60 mg natriy bikarbonatva 0,3g natriy xlorid 25 ml suvda eritiladi va unga 75 ml etil spirti qo‘shiladi). 159 1-tajriba. Erkin bilirubinga oid rangli reaksiya Ishni bajarish tartibi. A) Erkin bilirubinni aniqlash. Probirkaga 1 ml qon zardobi,2 ml etil spirti solinadi va aralashma filtrlanadi. Filtrat ustiga 5 tomchi yangi tayyorlangan diazoreaktivning aralashmasi tomiziladi, natijada qizg‘ich-pushti rang hosil bo‘ladi. B) Bog‘langan bilirubinni aniqlash. Tagiga oq qog‘oz to‘shab qo‘yilgan soat oynachasiga 1 tomchi bog‘langan bilirubinli qon zardobi (konservalangan) tomizib ustiga 3 tomchi yangi tayyorlangan diazoreaktivning aralashmasi qo‘shib shisha tayoqcha yordamida aralashtiriladi. Bunda bilirubinga xos qizil rang paydo bo‘ladi. 2-tajriba. Yendrashek va Kleggori usulida qon zardobi tarkibidagi bilirubin miqdorini aniqlash Ishni bajarish tartibi. 1 ml qon zardobiga 1ml distillangan suv qo‘shiladi va uchta probirkaga bu suyultirilgan qon zardobidan 0,5 ml dan solinadi. So‘ng birinchi va ikkinchi probirkalarga 2 ml dan kofein reaktividan, uchinchi probirkaga 2 ml 0,9 % li natriy xlorid eritmasi solinadi. Bundan keyin birinchi va uchinchi probirkalarga 0,3 ml dan diazoreaktivdan, ikkinchi probirkaga 0,3 ml 0,9 % li natriy xlorid eritmasidan qo‘shib, 10 daqiqa o‘tgandan keyin FEK da birinchi va uchinchi probirkalardagi aralashma ikkinchi (nazorat) probirkadagiga qarshi yashil svetofiltrda fotoelektrometrlanadi. Olingan ma’lumotlar kalibrlangan egri chiziq ma’lumotlaridan foydalangan xolda mg/% hisobidagi ko‘rsatkichga aylntiriladi. Erkin bilirubinning miqdorini umumiy bilirubin miqdoridan ayirish asosida bog‘langan bilirubin miqdorini keltirib chiqariladi. Kalibrlangan egri chiziqni chizish uchun 10 mg bilirubinni 50 ml xloroformda eritiladi, bu eritmaning 1 ml da 0,2 mg bilirubin bo‘ladi. to‘rtta probirka olib ularning birinchisiga 0,1ml, ikkinchisiga 0,2ml, uchinchisiga 0,3 ml va to‘rtinchisiga 0,4 ml dan shu xloroformli standart eritmadan solinadi, ularga bikarbonat eritmasidan 0,8 ml dan va diazoreaktivdan 0,3 ml dan qo‘shiladi. Probirkalardagi aralashmalar yaxshilab aralashtirilgandan so‘ng ularning har birini hajmi 2,8 ml ga yetkaziladigan hajmda etil spirti qo‘shiladi. Aralashmalar yuqorida keltirilganidek yashil svetofiltrda fotokolorometrlanib, olingan ma’lumotlardan kalibrlangan egri chiziq chizishda foydalaniladi. |
