Microsoft Word 60 2012 Белясова doc

Достижение высокого уровня транскрипции чужеродных ге-
нов. Для того чтобы эукариотические гены транскрибировались в про-
кариотических клетках, их обычно подставляют под контроль сильных 
промоторов (обеспечивают высокую частоту событий инициации 
транскрипции) прокариот. Наиболее часто для этих целей используют 
сильные промоторы кишечной палочки: лактозного оперона – PlacUV5, 
триптофанового оперона – Ptrp; гибридные промоторы, например
Ptrp-lacUV5 (Ptac), промоторы фага 
λ – PR, PL, а также других фагов 
(Т5, Т7, 
ϕХ174). Выделение этих промоторов и включение их в состав 
векторов осуществляют в ходе генноинженерных манипуляций. На си-
лу промотора существенно влияют последовательности –35 и –10, а 
также расстояние между ними. Например, мутация UV5 усиливает 
транскрипцию с промотора лактозного оперона. Секвенирование пока-
зало, что мутация затрагивает область –10, которая в промоторе дикого 
типа Plac имеет структуру ТАТGTT, а в промоторе PlacUV5 изменена 
так, что соответствует наиболее часто встречающейся последователь-
ности TATAAT. В одном из исследований показано, что трансформа-
ция E. coli плазмидой pMB9, несущей ген araC E. coli, приводит к
4-кратному увеличению синтеза белка АraC в клетках. Если же этот ген 
дополнительно поместить под контроль промотора PlacUV5, то про-
дукция белка возрастает уже в 50 раз. У промотора Ptrp, в отличие от 
PlacUV5, «идеальной» является область –35. Г. Бойер с соавторами в 
1982 г. сконструировали гибридный промотор, названный ими Ptac 
(Ptrp-lacUV5), который оказался в 5–10 раз более эффективным, чем 
PlacUV5. В ряде лабораторий были созданы векторные плазмиды экс-
прессии, у которых сильные промоторы тандемно повторены, что при-
вело к усилению транскрипции соответствующих генов. 
Еще более совершенной является методология использования ре-
гулируемых промоторов, которые инициируют процесс эффективной 
транскрипции лишь в определенных условиях. Такими промоторами 
являются, например, PR и PL фага 
λ. Их используют в клетках, содер-

---

116 
жащих температурочувствительный сI-репрессор, ген которого может 
быть расположен на векторе или совместимой с ним плазмиде. В таких 
клетках экспрессия чужеродного гена под контролем PR или PL будет 
происходить лишь после инактивации репрессора повышением темпе-
ратуры ферментации. При этом можно добиться в E. coli продукции 
различных белков, превышающей нормальный уровень в десятки раз. 
Использование прокариотических регуляторных элементов, рас-
положенных на многокопийных плазмидах, позволяет достигать 
уровня синтеза мРНК чужеродного гена до 25% от всей РНК бактери-
альной клетки.