Microsoft Word 60 2012 Белясова doc

Достижение высокого уровня трансляции чужеродных генов. 
Еще одним условием эффективной экспрессии клонированных генов яв-
ляется наличие перед геном чужеродного белка оптимального сайта 
инициации трансляции мРНК. На частоту событий трансляции наи-
большее влияние оказывает структура участков мРНК, обеспечивающих 
ее связывание с рибосомой и тРНК. Показано, что олигонуклеотидная 
последовательность, расположенная на 5
′-конце и непосредственно 
примыкающая к стартовому кодону, обеспечивает комплементарное 
спаривание с нуклеотидами антикодоновой петли тРНК. В то же время 
среди нуклеотидов мРНК, участвующих во взаимодействии с рибосо-
мой, достоверно установлена роль пурин-богатого участка на расстоя-
нии 3–15 нуклеотидов от стартового кодона (последовательность Шай-
на – Дальгарно, или SD-последовательность). Длина SD-последователь-
ности, а также ее расположение относительно стартового кодона 
существенно сказываются на связывании рибосом с мРНК, а значит, и 
на частоте событий инициации трансляции. 
Известно три основных подхода к конструированию векторов, 
обеспечивающих трансляцию чужеродной ДНК в бактериальных 
клетках. Одним из наиболее распространенных является метод конст-
руирования гибридных участков связывания рибосом. Суть его за-
ключается в том, что структурная часть чужеродного гена (с соб-
ственным стартовым кодоном и несколькими нуклеотидами перед 
ним) включается между SD-последовательностью и стартовым кодо-
ном прокариотического гена. Такой метод имеет преимущество, со-
стоящее в образовании полноразмерного чужеродного белка. Однако 
существенным недостатком метода является трудность достижения 
оптимального удаления стартового кодона от SD-последовательности, 
что, как указывалось, очень важно для инициации трансляции. Поэто-
му применяют другой подход, в котором чужеродный структурный 
ген, лишенный собственных регуляторных областей, внедряют в состав 

---

117 
хорошо экспрессируемого бактериального гена. Для этих целей чаще 
всего используют lac-промотор с соответствующей последовательно-
стью Шайна – Дальгарно. Сайт внедрения должен быть достаточно 
удален от места инициации трансляции, чтобы новая нуклеотидная по-
следовательность не мешала эффективной инициации транскрипции и 
трансляции бактериального гена. При экспрессии векторов такого типа 
образуется гибридный белок, в котором N-концевая часть представлена 
аминокислотами прокариотического пептида. Поэтому для выделения 
эукариотической полипептидной цепи требуется дополнительная хи-
мическая или ферментативная обработка. 
Наконец, третий подход к конструированию векторов, обеспечи-
вающих эффективную трансляцию, использует принцип «перекрыва-
ния» генов. В этом случае чужеродный ген встраивают в концевую