Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 50 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
Diagram 1. Example of the Plate Method and placement of the standard curve 
and unknown sample onto triplicate agar plates. 6/19/17 MBB. 
Prior to testing, the unknown sample [U3] must be diluted to a known 
concentration. See USP <81> for the list of recommended concentrations of 
median reference standards used in test. The target concentration is typically 
equivalent to the median reference standard [S3] of the standard curve. 
Diluting the unknown sample [U3] in this manner ensures a detection limit 
within the linear portion of the standard curve. For example, if the median 
reference standard [S3] has a concentration of 10.0 ug/mL, the unknown 
sample [U3] will also be diluted to a concentration of 10.0 ug/mL. See Diagram 
1 for an example of one independent test run for the Plate Method and 
placement of the standard curve and unknown sample onto triplicate agar 
plates.
Quality control (QC) plates may include a test of respective diluents used for 
the reference, standard curve ([S1]-[S5]) and/or test/unknown sample [U3]. 
One of three QC plates should be dedicated for the evaluation of the inoculum 
used in test; specifically, this plate will only contain the test inoculum, will be 
free of penicylinders and should exhibit uniform growth (i.e. lawn) on top and 
within the agar. Microbial growth other than the lawn indicates the inoculum 
used in test may be contaminated and/or the technique used in preparing the 
single and agar plates may have been compromised the agar plates. The 
remaining two of three QC plates should be dedicated to each specific diluent 
used in test; for example, Water for Injection (WFI) and Buffer No. 4 are used 
in Vancomycin testing and therefore two QC plates, each containing WFI or 

---