Pharmaceutical Microbiology Manual

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FFICE OF 
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EGULATORY 
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FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 36 of 92
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continue product dilution until the actual endotoxin concentration can be 
calculated. These results should be recorded on your worksheets. 
B. Photometric Quantitative Techniques 
Endpoint and kinetic assays are photometric quantitative assays used for the 
detection of bacterial endotoxins. Endpoint and kinetic assays may utilize 
turbidimetric or chromogenic formats. Endpoint assays measure endotoxin the 
increase in turbidity (turbidimetric) or color (chromogenic) at the end of the 
incubation time. 
This section provides procedural information that can be applied to kinetic 
assays. The Kinetic Chromogenic and Turbidimetric reagents are 
commercially available. Assay may be purchased as a kit. A certificate of 
analysis should be maintained for the control standard endotoxin, Limulus 
Amebocyte Lysate (LAL), and pyrogen free water used in the assay. Other 
materials such as pyrogen free pipettes, micropipettor tips, test tubes, and 96-
well microplates may be purchased from various vendors. Certificates of 
analysis indicating these materials are pyrogen-free should also be maintained 
by the laboratory. 
1. Kinetic Assays: The kinetic bacterial endotoxin detection software is 
designed to run the following assays. 
a. Initial qualification of a lysate/Initial qualification of the testing 
analyst 
b. RSE/CSE assesses potency of control standard endotoxin (CSE) 
in terms of reference standard endotoxin (RSE)
c. Test for Interfering Factors 
d. Sample Test 
e. Instrument Calibration Tests 
The initial qualification assay verifies the proficiency of the analyst operating 
the Kinetic software and equipment. The initial qualification assay may also be 
used to qualify each new lot of kinetic lysate and control standard endotoxin. 
Requirements of USP <85> must be followed with respect to the number of 
endotoxin standards and the number of replicates required for a valid assay. 
The RSE/CSE assay may be used to compare the potency of the CSE with the 
concentration of the RSE. Normally, the RSE/CSE assay does not need to be 
performed, unless there is reason to believe the values in the manufacturer’s 
certificate of analysis (COA) are not correct. 
The test for interfering factors must be run for each sample.

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