Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 6 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
The estimate of inoculum concentration may be obtained by turbidimetric 
procedures for the challenge microorganisms and later confirmed by plate 
count. 
Refrigerate the suspension if not used within 2 hours at 2-8° C. 
Determine the number of CFU/mL in each suspension using the appropriate 
media and recovery incubation times to confirm the CFU/mL estimate. 
Use bacterial and yeast suspensions within 24 hr. of harvest. The mold 
preparation may be stored under refrigeration (2-8° C) for up to 7 days. 
Note: Alternative commercially available standardized cultures may be used in 
lieu of in-house prepared cultures. 
F. Procedure 
The procedure requires that the test be conducted with a suitable volume of 
product. It is advisable to begin with at least 20 mL of product. Use the 
original product containers whenever possible or five sterile, capped 
bacteriological containers of suitable size into which a suitable volume of 
product has been transferred. If the diluted product exhibits antimicrobial 
properties, specific neutralizers may need to be incorporated into the diluents 
or the recovery media. For purposes of testing, products have been divided 
into four categories: 
Category 1 – Injections, other parenteral including emulsions, otic products, 
sterile nasal products, and ophthalmic products made with aqueous bases or 
vehicles. 
Category 2 – Topically used products made with aqueous bases or vehicles, 
non-sterile nasal products, and emulsions, including those applied to mucous 
membranes. 
Category 3 – Oral products other than antacids, made with aqueous bases or 
vehicles. 
Category 4 – Antacids made with aqueous bases or vehicles. 
Inoculate each container with one of the prepared and standardized inoculums 
and mix. The volume of the suspension inoculums used is 0.5% to 1.0% of the 
volume of the product. The concentration of the test organisms added to the 
product for Categories 1, 2 and 3 is such that concentration of the test 
preparation immediately after inoculation is between 1x10
5 
and 1x10
6 
colony 
forming organisms (CFU) per mL of product. If no suitable neutralizing agent 
or method is found and method suitability requires significant dilution, a higher 
level of inoculum (e.g., 10
7
-10
8
) may be used so that a 3-log unit reduction can 

---