Учебное пособие для студентов 1-2 курсов лечебного, педиатрического, стоматологического факультетов Новосибирск 2011 Под редакцией профессора В. И. Шарапова

Ход работы: вместо сыворотки ротовую жидкость.
Принцип метода: О трансаминазной активности сыворотки крови судят по количеству ПВК, образующейся при переаминировании из аланина или в результате декарбоксилирования щавелеуксусной кислоты, образующейся при переаминировании из аспарагиновой кислоты (АСТ). ПВК взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином, с образованием 2,4-динитрофенилгидразона пировиноградной кислоты. При обработке динитрофенилгидразона щелочью образуется окрашенное в красный цвет соединение. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству ПВК.
Ход работы: В пробирку вносят 0,1мл сыворотки и 0,5мл субстратной смеси, составленной из аланина и альфа-кетоглутаровой кислоты. Пробирку помещают в термостат при 37 град С на 15 минут, затем добавляют 0,5мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина и оставляют стоять при комнатной температуре на 10 минут, после чего приливают 5мл NаОН и через 10-15 минут колориметрируют на ФЭКе в кювете на 0,5см с зеленым светофильтром против контроля.
Контроль: К 0,2мл Н2О приливают 1мл субстратной смеси, 1мл 2,4- динитрофенилгидразина и через 15 минут 10мл NаОН (обязательно соблюдать порядок добавления реактивов). После фотометрирования используют калибровочный график. Активность АЛТ выражают в мкм ПВК, образованной под действием ферментов, содержащихся в 1мл слюны за час при 37 град
Норма: АЛТ- 0,1-0,68 мкм/л.ч

АСТ- 0,1-0,45 мкм/л.ч

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №5
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В СЛЮНЕ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ (ПО ОКИСЛЕНИЮ ФЕНОЛФТАЛЕИНА)
Принцип метода:

В-d глюкоза + в-d глюкозооксидаза глюколактон + ФАДН2

-------------------------
ФАД

ФАДН2+О2 = ФАД +Н2О2

Образущаяся перекись водорода в присутствии ионов меди окисляет фенолфталеин до соединения, которое в щелочной среде окрашено в красный цвет.

Ход работы: 0,2 мл слюны вливают в 2мл 5% ТХУ, перемешивают и фильтруют через смоченный дистил. водой фильтр. К 1мл фильтрата прибавляют 2мл 0,25 моль/л фосфата натрия и 1 каплю раствора глюкозооксидазы. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 мин. Затем добавляют 2 мл рабочего реактива и через 5мин фотометрируют в кюветах толщиной 1 см при зеленом светофильтре против дистил. воды.
Количество глюкозы в слюне определяется по калибровочному графику. Концентрацию глюкозы в слюне определить до и через 15 мин. после приема сладостей и последующего применения различных гигиенических средств. Для гигиенических мероприятий использовать общедоступные средства: водопроводную воду, 1-2% раствор бикарбоната натрия, зубную щетку или одну из не содержащих сахара жевательных резинок.
Содержание глюкозы определять орто-толуидиновым методом.