Volgograd davlat ijtimoiy-pedagogika universiteti

PGDda qo'llaniladigan PCR strategiyalari

Yuvalangan sovrinlar bilan PCR
Etidiy bromid yoki kumush nitrat bilan bo'yash orqali geldagi PCR mahsulotini aniq aniqlash uchun noyob ketma-ketlikka ega taxminan 50 dan 60 gacha PCR tsikli kerak bo'ladi, garchi Taq polimeraza taxminan 40 tsikldan so'ng "xato qila" boshlashi mumkin, bu esa noto'g'ri ishlashga olib keladi. maxsus mahsulot. Ushbu muammoni bitta DNK molekulasidan PCR sezgirligi va o'ziga xosligini oshirish uchun ichki primerlar bilan PCR yordamida hal qilish mumkin. PCRning birinchi raundida mumkin bo'lgan mutatsiyani o'z ichiga olgan tahlil qilingan DNK fragmenti miqdori ortadi. PCR mahsuloti (birinchi turda olingan) birinchi bo'lak ichida joylashgan boshqa primerlar to'plami bilan kuchaytirishning ikkinchi bosqichi uchun shablon sifatida ishlatiladi. Shunday qilib, PCRning o'ziga xosligi ortadi. Ikki xil primer to'plamidan foydalanish ifloslanish xavfini sezilarli darajada kamaytiradi.
Floresan yorliqli primerlar yordamida PCR
Flüoresan yorliqli primerlar (FPCR) yordamida PCR yaqinda ko'p sabablarga ko'ra tanlov usuliga aylandi va laboratoriyalarda bir hujayrali DNK tahlili uchun keng qo'llaniladi. Turli lyuminestsent molekulalar bilan etiketlangan parchani avtomatik tahlil qilish uchun lazer tizimlaridan foydalanish etidiy bromid yoki kumush nitrat bilan bo'yash bilan solishtirganda PCR mahsulotini aniqlash sezgirligini sezilarli darajada oshiradi, shuningdek, ifloslanish xavfini kamaytiradi. Avtomatik tizim hosil bo'lgan mahsulot hajmidagi o'zgarishlarni, hatto bitta nukleotidda ham aniq ushlaydi. Bundan tashqari, poliakrilamid jelida DNK bo'laklarining uzoq muddatli elektroforeziga ehtiyoj yo'q, shuning uchun tahlilni eng qisqa vaqt ichida amalga oshirish mumkin.
Butun genomni kuchaytirish
So'nggi paytlarda PGDda bitta hujayrani tahlil qilishda DNK miqdorini oshirishning asosiy usuli bu genom bo'ylab kuchaytirish (GA). Ushbu usuldan foydalanish PCR uchun zarur bo'lgan DNK shablonining miqdorini sezilarli darajada oshirish imkonini beradi. Butun genomni kuchaytirishning eng ko'p qo'llaniladigan usuli bu qo'shimchali preamplifikasyon (ADP). Ushbu usul yordamida 15-nukleotidli primerlarning tasodifiy ketma-ketligi genomik DNK sintezini boshlaydi.
PA ning kamchiligi shundaki, ko'p miqdorda takrorlanuvchi DNK kuchaytiriladi (qisqa tandem takrorlari), bu o'ziga xos PCR xatolariga olib kelishi mumkin bo'lgan o'ziga xos "fon" beradi. Bu xatolar, ayniqsa, ushbu usul talab qiladigan past haroratlarda, mahsulotni polimerizatsiya qilish jarayonida DNK zanjirining siljishidan kelib chiqadi. Shu munosabat bilan, trinukleotidlar takrorlanishining kengayishi bilan bog'liq bo'lgan kasalliklarning klinik diagnostikasi yoki yuqori polimorfik mikrosatellit takrorlari bilan bog'lanish tahliliga asoslangan diagnostika uchun genom bo'ylab kuchaytirishdan foydalanish tavsiya etilmaydi.


XULOSA

Amalga oshirilgan ishlarga asoslanib, hozirgi vaqtda klinik genetika usullari murakkab va xilma-xil degan xulosaga kelish mumkin. Ularning yordami bilan gen apparatining ko'plab kasalliklarini aniqlash, homiladorlikning dastlabki bosqichlarida turli xil mutatsiyalarni aniqlash va tashxis qo'yilgan kasallik jiddiy bo'lsa, uni vaqtida to'xtatish masalasini ko'tarish mumkin. Bundan tashqari, klinik genetika yordamida nafaqat ma'lum bir odamda kasallikni aniqlash, balki uning oilasida har qanday irsiy kasalliklarning paydo bo'lishi haqida prognoz qilish va ba'zi tavsiyalar berish mumkin.

Afsuski, yuqoridagi usullarning barchasi bitta muhim kamchilikka ega ekanligini tan olishga majburmiz - ularning yuqori narxi. Biokimyoviy usullardan foydalanish juda qimmat; faqat eng yaxshi prenatal diagnostika markazlari PCRni o'tkazishga qodir. Klinik genetika usullarining katta narxi ularning tarqalishiga va davlatning ularga nisbatan siyosatiga katta ta'sir ko'rsatadi.
Mamlakatimizda juda kam odam yuqorida sanab o'tilganlarga o'xshash har qanday testlarni o'tkazishga qodir. Shuning uchun, homilador onaning bolasida jiddiy irsiy kasallik borligi ko'pincha ajablanib bo'ladi - va bu bola tug'ilgandan keyin emas, balki homiladorlik paytida aniqlansa yaxshi bo'ladi.
Bunday holatlarning oldini olish uchun qimmat genetik tahlil narxini kamaytirish uchun hamma narsani qilish kerak. Shunda biz ishonch bilan ayta olamizki, mamlakatimizda odamlarga yaxshi, eng muhimi, zamonaviy tibbiy xizmat ko‘rsatilmoqda.