­Ўзбекистон республикаси соғЛИҚни сақлаш вазирлиги тошкент педиатрия тиббиёт институти

Ҳисоблаш:
Назорат тажрибасига тузатишни қуйидаги формула билан киритилади:

(∆Е / ∆t)_таж – (∆Е / ∆t)_наз = (∆Е / ∆t)_корр.

Тажриба намунаси қийматлари кейинги ҳисоблашларда фойдаланилади. Ҳисоблаш қуйидаги тенглама ёрдамида аниқланади:

Фаоллик, моль / (с ∙ м³) = нмоль / (с ∙ л) ∙ 10⁶ =

= V_р.а. / ε ∙ l ∙ V ∙ (∆Е / ∆t)_корр.
Бу ерда:
V_р.а. – реакция аралашмаси ҳажми, мл.
корр – тажриба намунасини корректирланган қиймати
V – қон зардобининг ҳажми, мл;
t – реакция вақти, сек;
∆Е/∆t – 1 сониядаги экстинкциянинг ўзгариши.
l – кювета қалинлиги, (1 см)
ε – моляр коэффициент (5,6 ∙ 10² м² ∙ моль^-1 340 нм да)
∆Е – вақт оралиғидаги экстинкциянинг ўзгариши
Эслатма. Фермент фаоллигини аниқлашни микроусулда ҳам олиб бориш мумкин. Бунинг учун аниқлашдан олдин реактивлар аралашмаси тайёрланади, субстрат-буфер эритмаси, НАДН ва ЛДГ эритмалари 60 : 1 : 2 нисбатда олинади. Тажриба намунасига киради: эритмалар аралашмаси – 0,630 мл; қон зардоби – 0,10 мл; α-кетоглутар кислота – 0,02 мл. Аниқлаш худди макроусул схемаси бўйича амалга оширилади.


Услубни қадам-бақадам бажариш

1. 
   Қуруқ тоза пробиркалар номерланади, тажриба намунаси - №1, назорат намунаси - №2.
   
2. 
   №1 ва №2 пробиркаларга 3 мл дан субстрат-буфер эритмасидан қуйилади.
   
3. 
   №1 ва №2 пробиркаларга 0,05 мл НАДН эритмасидан солинади.
   
4. 
   №1 ва №2 пробиркаларга 0,1 мл ЛДГ суспензияси солинади.
   
5. 
   Тажриба пробиркасига 0,5 мл қон зардобидан қўшилади.
   
6. 
   Назорат пробиркасига 0,05 мл 154 ммол/л NaCl эритмасидан қўшилади.
   
7. 
   Тажриба ва назорат пробиркаларидаги суюқликлар аралаштирилиб, 37⁰С ли термостатга 10 минут қўйилади.
   
8. 
   Инкубациядан сўнг №1 ва №2 пробиркаларга α-кетоглутар кислотасидан қўшилади.
   
9. 
   Тажриба ва назорат пробиркаларидаги эритма экстинкцияси сувга нисбатан спектрофотометр қалинлиги 1 см бўлган кюветада 340 нм тўлқин узунлигида ўлчанади.