­Ўзбекистон республикаси соғЛИҚни сақлаш вазирлиги тошкент педиатрия тиббиёт институти

Биоматериалларни олиш. Шприц ёрдамида қуруқ центрифуга пробиркасига 1,0-2,0 мл қон венадан олинади. Қон 10 дақиқага қолдирилади, сўнгра эҳтиётлик билан игна ёрдамида пробирка деворларидан ажратилади. 1500 айл/мин билан 10 минут центрифугаланади. Қон зардоби алоҳида пробиркага олинади. Зардобни музлатилган ҳолатда 1 ой сақлаш мумкин. Ташхис учун 0,02 мл зардоб ишлатилади.


Реактивлар:

1. 
   Буфер фермент (1 флакон): натрий 5,5-диэтилбарбитурат 1,11 ммол, ЕДТА 31,24 ммол, уреаза 8 μкат/флакон, натрий азиди 12,5%
   
2. 
   0,014 мол/флакон натрий салицилат (1 флакон)
   
3. 
   1,8 ммол/флакон натрий нитропруссид (1 флакон)
   
4. 
   Натрий гидрохлорит (20 мл) 0,2 мол/л натрий гидрохлорит, 3 мол/л натрий гидроксид
   
5. 
   Стандарт эритма, 15 ммол/л (10 мл) сийдикчил
   

Реакцион аралашма таркиби:
Барбиталли буфер 2,6 ммол/л
Уреаза 8,85 мккат/л
Натрий салицилат 170 ммол/л
Натрий нитропруссид 1,8 ммол/л
Натрий гидрохлорит 4,4 ммол/л
Натрий гидроксид 66 ммол/
Зардоб/реакция аралашмаси нисбати 1/226


Эритмаларнинг тайёрланиши

1. 
   Буфердаги фермент эритмаси. 1-флакондаги модда 100 мл дистилланган сувда эритилади. Турғунлиги: 10 кундан кам эмас (+2 дан +8 гача) ⁰С.
   
2. 
   Нитропруссид эритмаси. 2- ва 3-флаконлардаги моддалар 400 мл дистилланган сувда эритилади. Турғунлиги: қоронғида (+2 дан +8 гача) ⁰С да 14 кундан кам эмас.
   
3. 
   Гидрохлорит эритмаси. 4-флакондаги модда дистилланган сув билан 400 мл гача суюлтирилади. Турғунлиги: 1 ойдан кам эмас (+2 дан +8 гача) ⁰С.
   

Ташхис шароити
Тўлқин узунлиги (540 – 560) нм
Кювета 1 см
Реакция ҳарорати (+15 дан +25 гача) ⁰С инкубация ҳарорати (37±0,1) ⁰С


Услубни қадам-бақадам бажариш

1. Қуруқ пробиркалар олинади ва улар (№1, №2, №3….) қилиб рақамланади.

2. Ҳамма пробиркаларга 0,02 мл қон зардоби ёки ажратилган сийдикчил солинади.
3. Алоҳида пробиркага (стандарт №5 реактив) 0,02 мл стандарт эритма солинади.
4. Алоҳида пробирка (солиштириш эритмаси) - синов текширувига ҳеч нарса қўшилмайди.
5. Барча пробиркаларга 0,50 мл буфердаги фермент эритмаси қўшилади.
6. Барча пробиркалар аралаштирилади ва 37 ⁰С да 10 мин инкубацияланади.
7. Барча пробиркаларга нитропруссид эритмасидан 2,0 мл дан қўшилади.
8. Барча пробиркаларга гидрохлорит эритмасидан 2,0 мл дан қўшилади.
9. Гидрохлорит эритмаси қўшилиши биланоқ барча пробиркалар аралаштирилади.
10. 15 мин (25 ⁰С) дан сўнг барча пробиркалар яна аралаштирилади.
11. Солиштириш эритмасига қарши барча қон зардобили (А₁) ва стандартли (А₂) синамаларнинг оптик зичлиги аниқланади.