Аффин хромотографияси

Специфик липидларни ажратиш

Агарда аникланаётган аминокислоталар оксилланган юзасида ёки фаол марказида жойлашган булса,у холда пепсиситларнинг ажралиши Билан борадиган оксилларнинг кимёвий модинфикациясини мувофиклиги кулланилади. Бирок модификацияланган колдикни тутувчи пепсиситларни ажралиш осон эмас чунки авваламбор модификацияловчи реоген купинча бошка колдиклар Билан таъсирланиб турли хил махсулотлани хосил килади.шу сабаб оксил шуролизати бир нечта модификацияланган пепсиситларни тутиб уларнинг хар бир оксилга нисбатан эквимолярдан кам микдорда булади. Темпиратурани ажратиш анъанавий усулларга 48 ичига мураккаб ва узок муддатли аперацияларни уз ичига олади. Уларнинг хар бир боскичи сунги липид микдорини сезиларли даражада пасайтириб юборади. Модифирловчи реагентга нисбатан специфик булган сарбентлар аффин хроматографиясини куллаш бир боскични узида модификацияланган пептиддан ажратишга имкон беради.
Велгек (62) оксил модификациясининг 3 категориясини фарклайди.

1. 
   колдик оксилнинг фаол марказидаги йуналтирилган модификация ёки аффинини киритилиши.
   
2. 
   оксил юзасида жойлашиш ёки юкори риакцияни хусусияти Билан шартланган бир ёки бир нечта колдикларни танлаган модификацияси.
   
3. 
   аминокислотали кетма-кетлик аниклаш микдори шу гурух учун специфик булган реогент Билан маълум аминокислоталар барча гурухларнинг тулик модификацияси.
   

Биринчи 4 га субстрат аналагапри риякциялари хос булиб улар ферментларнинг фаол марказидаги гаптенлар Билан кечади.
Аффен- нининларнинг оксилдант номонланган пепсиситларнинг ажратишни умумий схемаси(62)
Бундай холларда Яна оксиллнинг борувчи марказидаги специфик ва кйтар богланишда аффин центри буйича ( ёки унинг якинда) ковален боглар хосил булади. 6.11 расимда аффин номланган оксилдан номланган пипсиситлани ажратишни умумий схемаси келтирилган эритмани ташувчи Билан коваллен богланган нотив оксил фермент ёки анттиле аффин нималанган липетидан сорбцияланади.колонка ювилгандан сунг специфик сорбентланган нималанган дисорциаланган гидроитни аралаштиришимиз мумкин. Вилчек (61) Ушбу усулни стафилакок пуклиазатсиядан аффен нишонланган пептитларни ажратишда куллаган.
специфик антитэлалар юкори ухшаш билан барча кичик маликулаларга нисбатан ошиши мумкин. Бундай йул билан олинган специфик антителалар эридиган ташувчи билан ковалент богланган холда мос келувчи кичик маликулаларни пептитлар учун специфик сорбентлар хисобланади. Мисол сифатида тирик нитпотралпразил-лизацм (26)гидролизатидан нитрозитувчи пептитлпрни ажратишни келтириш мумкин. Бундан аффен сарбент сифатиди сефарозага бириктирилган ва нитротразил колдикка нисбатан олинган антителалар кулланди агар нитралланган оксилнинг ферментатив гидролизатини нитротиразинга нисбатан сезгир антителалар бириктирилган калонка орколи у холда барча пептитлар (нитротиразин тутганлардан ташкари) биринчи нуктада олишга мувофик булинади. Нитротразин пептитлар кегинчалик 1H амяк Билан илюрланади. Ушбу усулни маликула юзасида жойлашган тирозин колдикларини аниклаш максадидаги оксил топографласини таткик этишда куллаш мумкин.
Секвинаторни пайдо булишидан кейин оксилни амино кислота кетм кетлигини тахлил этиш вакти пептитларни тозалаш боскичида аникланадиган булди.
Маддификацияланган пептидларни танлаб ажратишнинг самарали ва сезгир усулларини ишлаб чикиш микдорида олиб булмайдиган пептидларни оксиллардан оз микдорда олиш имконини беради.