Аффин хромотографияси

Липидлар, гармонлар ва бошка фаол моддаларни ажратиш.

Додициланиш липидларни ажратиш учун фойдали аффин лиганд хисобланади (12) тормонларни ажратиш вактида мос келувчи антителалар , транспорт оксиллари ва лепедлар аффин сорбент сифатида хизмат килади. (11.1 жадвалга каратилган) мисол сифспитида лютинловчи гармонга антителаларни имуноглобни фракцияларига коволен богланган сеферазоядаги куйнинг лютенловчи гармонинг аффин хроматографиясини келтириш мумкин.

Вабо таксини (захари) vibrio choleral эгзо токсин –оксил булиб симперимент юзага киради. vibrio choleral кулъпура музтида тансин жуда кичик конупетрияларда булиб механик 1мт ни ташкил этади.Таксин баьзибир мия гантиозидлари Билан кучли ва специфик богланади. Мембранада жойлашган моносиалоганглиозидлар Сли табий рецепторлар булиб вабо токсини Билан узига хос тарзда узаро таьсирланиб натижада эса тукимадаги адениллатциклоза тизимини рагбарлантиради. Эримайдиган ташувчилар Билан богланган ганглиозидлар вабо таксини учун аффин сарбенти хисобланади. Бу таксин Яна фетуин ва тироглобулинлар каби базибир гликопротеинларни боглаб олади.
Футуин бириктирилган агарозадаги еки ганглиозид-диаминопропиеламинагорозадаги (45) Vibrio cholerae дан ажратиб олинган таксиннинг плионланган 125 аффин храматорграфияси 6.15 расмда келтирилган. Ганглиозидлар бириктирилган агароза Яна бошка захарли оксилларни тозалашда куланиши мумкин булган сарасига ботулин еки кокшол таксини кириб,малумки улар Еркин ганглиозидлар Билан мустахкам коьплекслар хосил килади.
Мухитда оксилларнинг ген бошкаручиларнинг кам микдорда булиши бу одий холдир.Бошкарувчиген ага С (L-арабиноза оперониддан)улкокс ва клементсонлар томонидан 4-(-4-(4-аминафения)-бутанамидо)фенил-В-D-фукопирохозидилган сефарозадаги ажратиб олишган.
Вирус ва хужайраларни ажротиш.
Специфик ташувчиларга асосан гранулаланган биоспецифик реогент Билан копланганларига нисбатан афинлиги асосланиши турли хил системаларда куланилади. Антигенлар ,антителалар,липинлар ва гармонларкаби зарур спецфикликка адсорбцияланади еокаваленит.
Хужайраларни аффин фракцялаш купинча лимфоид хужайралар локулятсиясини анализида куланилади. Метюз ва бу (36) каламушини агрегацяланган иммунаглабулини бириктирилган сефарозадаги сичкон талоидан ва каламуш тишусидан ва талагидан лимфоид хужайраларни ажратиш усулини ишлаб чикилди.
Толаларда хужайраларни фуракцяларга ажратиш жарайонида (16) Ушбу хужайраларни ,лектин, антитело ва антигенлар каби мос келувчи хужайралар Билан модификатцяга учратилган тортилган толалар Билан узига хос, спецфик богланиш хусуцятидан фойдаланилади. Шундай фракционирлаш учун жудда щддий ,самарали ва арзон мослама бу Петри ликобчасидир .Унга нейлон толалар тортилган рашк бемалол сигади(енг узун толаларнинг узунлиги 2.5 ем га етади).Ушбуьослама,толаларда хужайраларни ажратищда юзага келадиган купгина кийинчиликларни енгиб утишга ердам беради.Фракдианирлаш е хужайра юзасидаги алохида компонентлар спецфик богланиш еки ухшашликдаги фарклар натижасида ,еки хужайра юзасидаги спецфиклиги буйича ухшаш булган ретсепторларнинг хар хил микдорда булиши ва уларнинг бир хилда тавсимланмаслиги натижасида еришилиш мумкин.
Толалар ердамида франсионирлашнинг асосий принспи 6.16 расмда курсатилган. Ушбу жараун учун мос келувчи молекула ва мокромолекулалар, намкуза тортилган нейрон молларга махсус кимевий усуллар Билан бириктирилгандир. Дисоцацяланаетган хужайра роларни улар учун мос келувчи мухитда толаларни силкитиш йули Билан ажратилади, сорбцяланмаган хужайралар еса ювилади, ундан сунг богланган хужайраларни толаларда бошка мухитга олиб утиш мумкин, кенглик уларни тафсифлаш еки тортишган толалардан игна ердамида Еркин холатгаолиш мумкин. Афин лигандларни толаларга Яна махсус боглар ердамида бириктириш мумкин. Бу уз навбатида хужайраларни, Ушбу боглврни кимевий ва ферментатив йули Билан поргалаш йули биланоркали ажратишга имкон беради.
найпон толасининг 1м гаконковолин А молекуласининг сонига караб еритросит ва глимоситларгатурли толаларда богланиши турли толаларда курсатилган.
Транспорт РНК синтетик химояланган олигануклетидлар ажратиш учун БD-сефадекс куланилади. Бу DEAE-сефадекснинг А-25мепофил хосиласидир. У бензоиларни оркама олинган булиб, 12 курук гелнинг бензогин гурухларининг 5мэк га эквивалентдир. РНК сигими 1 мл калонка хателига 20мб ни ташкил этади. Рн нинг экистиримал холатларида матрица Билан бириккан армоник гурухларнинг эфир богларини гидролизи юз берганлиги учун фирма сорбентини фойдаланишидан олдин ювишни тавсия этади.
Гидрафоб хроматография учун CL - 4В фенил сефарози ишлаб чикарилади. Октил ва фенил гуру хлар матрицага сефарозани мувофик килувчи глицидил эфир Билан узаро таъсири натижасида киритилади, яний кутубланмаган тургун кимёвие эфир боглар ёрдамида богланган лигантларнинг концентрацияси икала гел учун таъхминан 1мл гелъ 40 микмолни ташкил этади, бу эса 0,2 молъ гидрафоб алмашинувчининг 1 молъ калкатозада алмашинувчининг мувоффик келади. Гелнинг богловчи хусусияти экиспириментнинг шароитига ва ажратилаётган оксил табиатига богликдир. 1 молъ самони тутган 0.01Н фасфат буфер эритмасида (рh 6.8) икала гел учун хам, 1 молъ гелъ одам одам зардоби абуменини 15-20 мт (молъ мА 0.68000) ёки 3-6мг Влокатала буминни боглайди.
Октисафарозалар CL -4В фенилсафароза суспензия шакилида такдим этиб диетилпирокорбонат Билан стеринланиб,таркибига 0,02% азод натрийкушилган булади.Октил хосиласининг суспензияси Яна 25% спирт тутади.Модалик сорбентлар СL-4В сефароза асосида таерланган булиб ;хамда 2,3-дибромпропонал Билан тикилиб ва десулфинирган булгани учун геллар жуда яхши хусусиятларга ега булади,шулардан енг мухимлари юкори киевий ва физикавий тургунликдир.Улар денамуратцяга учратувчи агентларга,яни мачевина гуанидинхларидга нисбатан тургун булиб, шунинг учун улар органик еритувчиларда ва ногеон детергентларда куланиши мумкин. Фирма генларни суспензия шаклида, музлаткичда 8С да саклашни хамда лиофил куринишни куламасликни тафсия етади.
Имобилланган аффин лигандларнинг куп кисмини РL Biochomicals фирмаси томонидан ишлаб чикарилади. Купгина аффин лигандлар матрица билан бир неча усуллар Билан богланиши мумкин.(6.5-жадвал)
1. тип бог матрицани узаро таъсирида хосил буган булиб, фазовий гурухга эга булиши ёки булмаслиги мумкин. Ушбу гурухлар бе восита аффин лигант уртасида, тикувчи агент, карбодимитни куллаш оркали хосил килинади. специфик боглаш нуктаси номалум (38).
2. тип бог аденозин халкасини амино гурух Билан хосил килинган (24).
3. тип бог адининг халкасининг С8- холати Билан хосил килинган (24.64).
4. тип бог риобзанинг гидрот оксил гурухи Билан хосил килининган ( 31).
5. тип бог лигантнинг меркапто гурухи Билан хосил килинган (9).
6. тип бог фаолланган бирамсиан агароза Билан аффин лигант риакцияси буйича хосил килинган. Бог табииати номалум( 32.59).
7.тип бог нуклиатитнинг ички фасфат гурухи Билан, одатда фасфат эфир бог куринишида булади (21).
Энзакириллар Билан богланган ферментлар, Koch-Light Labs фирмаси томонидан чикариб, таркибида L- амилоаза, каталаза, L-химатирипсин, декстраноза, гуликозаоксидаза, тиринсин, урсуза ва дирикозани тутади.аффин лигантлар учун ташувчи сифатидаги целиюлоза Mersk фирмаси томонидан хам етказилади.
Катор протинезоларни ажратиш учун суксинсияланган аминододэция целилюлозага 4-аминюбензамидин бириктирилади (1мл калонка хажмига 90-110 мк молъ), бунда калонкадаги сарбент хажми 12 нам сарбентга 1,2- 1,4мл ташкил етади.протинозаларни ажратиш учун бошка имобилланган ингибиторлардан фойдаланилади, бунда айнан сояли дукаклилардан ажратиб олинган тиринсин ингибиаторида, бунда у сукцинлианган аминогексил целилозаларга бириктирилгандир.