Islom karimov nomidagi toshkent davlat texnika universiteti oziq-ovqat kimyosi va biokimyosi
Download 1.1 Mb. Pdf ko'rish
|
Oziq ovqat kimyosi va biokimyosi fanidan laboratoriyaishlarini
- Bu sahifa navigatsiya:
- Solodning amilolitik faolligini aniqlash.
|
Solod fermentlarni ajratib olish. α – amilazani solod ferment
kompleksining asosiy eritmasidan β – amilazani inaktivizatsiyalash (faolligini yoʻqotish) yoʻli bilan ajratiladi. 100 ml hajmdagi kolbaga 20 ml solodning asosiy eritmasidan solib, 15 minut davomida 70 ○ C haroratda qizdiramiz. β-amilaza shu haroratda inaktivlashadi. Qizdirilgan eritmani sovutamiz va α-amilazani faolligini aniqlash uchun ishlatamiz. α-amilazani faolligini pH – 5,5-5,8 boʻladi, sovutilgandan keyin eriitmaga 4 ml pH 5,6 fosfatli bufer qoʻshiladi. β-amilaza solod sutidan (solodovaya vityajka) α – amilazani nordon muhitda inaktivizatsiyalash yoʻli bilan ajratiladi. 100 ml hajmli kolbaga 20 ml solodning asosiy eritmasini solib, muzli hammomda 10 minut davomida ushlab, unga 1 ml 0,1 n li HCl eritmasini qoʻshamiz. Hosil boʻlgan eritmani muz hammomida 15 minut qoldiramiz va unga 3 ml pH 6,0 fosfatli bufer qoʻshamiz (β-amilaza uchun optimal pH). Solodning amilolitik faolligini aniqlash. Shtativga 3 qator qilib nomerlangan pirobirkalar qoʻyamiz. Birinchi qatordagi hamma probirkalarga pipetka bilan 1 ml dan distillangan suv quyamiz, birinchi probirkaga 1 ml α-amilaza eritmasini qoʻshamiz. Birinchi probirkadagini aralashtirib, unga soʻrgich (grusha) bilan pipetka orqali havo yuboramiz. Birinchi probirkadan pipetka orqali 1 ml olib, uni 2- probirkaga solamiz. 2- probirkani aralashtirib, 1 ml olib 3- probirkaga solamiz. Xuddi shu yoʻl bilan 4- va 5- probirkalarda eritma tayyorlaymiz. Ikkinchi qatordagi probirkalarga β-amilaza eritmasini suyultirish yoʻli bilan qoʻshiladi. Uchinchi qatordagi probirkalarga solod ferment preparatining asosiy eritmasidan qoʻshiladi. Hamma probirkalarda suyultirilgan ferment preparatlari eritmalaridan 1 ml dan qolishi kerak. 64 Hamma probirkalarni 40 ○ C haroratda termostatlash kerak. Suv hammomidan probirkalarni olmay turib, har biriga 2 ml dan 0,1% kraxmal eritmasi, 10 minutdan keyin esa 2 ml yod ishchi eritmasi qoʻshiladi (0,1 n HCl eritmasida tayyorlangan). Rangli eritmalarning optik zichligi fotoelektrokolorimetrda oʻlchanadi. Bunda kyuvetaning qalinligi 10 mm, svetofiltrning toʻlqin uzunligi 670 nm boʻladi. Eritmadagi kraxmalning qoldiq konsentratsiyasi (C qol mg/ml) kalibrovkali egri chiziq orqali topiladi. Gidrolizlangan kraxmal miqdorini (X, mg) quyidagi formula orqali topamiz: X = (C ber - C qol ) . V, (17.1) bu yerda: C ber – ishchi eritmadagi kraxmal konsentratsiyasi, mg/ml; C qol – kalibrovkali egri chiziq orqali topilgan, ishchi eritmadagi kraxmalning qoldiq konsentratsiyasi, mg/ml; V – kraxmal ishchi eritmasi hajmi, ml. |
