M. G. Safin, B. S. Alikulov, F. A. Ruziev

Geksokinazaning faolligini aniqlash 

 

Kerakli  reaktivlar: 

1.  5x10

-2

 M tris-HCl  bufer eritmasi,  pH – 8,0; 

2.  5x10

-1

 M D-glyukoza  eritmasi; 

3.  4,5x10

-2

 M – MgCl

2 

eritmasi; 

4.  2,25x10

-2

 M ATF eritmasi; 

5.  1,0x10

-2

 M NADF eritmasi,  pH – 6,5; 

6.  Glyukoza  –  6  –  fosfat  degidrogenaza  (fermentning  asosiy  eritmasi  tris-HCl 

buferi bilan  50-100  marta suyultiriladi)  eritmasi; 

---

 

- 31 - 

7.  Geksokinaza  –  0,5  mg/ml  (faollikni  aniqlash  oldidan  tris-HCl  buferi  bilan 

suyultiriladi)  eritmasi. 

Barcha eritmalar  bidistillangan  suvda tayyorlanadi. 

 

Ish  tartibi:  Spektrofotometrning  kyuvetasi  0,4  ml  substrat  aralashmasi  (D-

glyukoza,  MgCl

2

  va  ATF)    0,1  ml  NADF  eritmasi,  0,01-0,04  ml  glyukoza-6-fosfat 

degidrogenaza    bo`lgan  eritma,  tris-HCl  buferining  50  mM  li  eritmasidan  qo`shib, 

umumiy  hajmi  3  ml  ga  yetkaziladi  va  yaxshilab  aralashtirilgandan  keyin  unga  0,01-

0,02  ml  geksokinaza  eritmasini  qo`shish  orqali  reaksiya  boshlab  yuboriladi. 

Reaksiyaning  boshlanishi  sekundlarda  qayd  qilinadi  va  340  nm  da,  har  sekund 

oralig`ida  optic  zichlikning  oshib  borishi  kuzatiladi.  Ajratib  olingan  ferment 

preparatini  solishtirma  faolligi  sarhisob qilinadi. 

 

Oqsil  miqdorini  spektrofotometrik  yo`l  bilan  280  nm  da  konsentratsiyasi  1,0 

mg/ml  bo`lganda   ko`rsatkichi 0,9 ga  tengligiga  qarab aniqlanadi.