M. G. Safin, B. S. Alikulov, F. A. Ruziev

Geksokinazali aralashmani DEAE-sellyulozali kolonkada  xromotogafiya o`tkazish 

yo`li  bilan  tozalash.  DEAE  –  sellyulozali  kolonka  tegishli  yo`riqnomaga  muvofiq 

ravishda  tayyorlanadi.  Kolonka  (3x25  sm  li)  fosfat  buferi  eritmasi  yordamida 

muvozanatlanadi.  Kolonkaga  yuqorida  olingan    sentrifugat  kiritiladi  va  muayyan 

fosfat  buferining  0-0,3  M  KCl  eritmali  chiziqli  gradiyentli  eritmasidan  foydalanib, 

elyutsiya  o`tkaziladi.  Elyutsiya  tezligi  90  ml/soat  ni  tashkil  qilib,  fraksiyalarni  9  ml 

hajmda  yig`ib    olinadi  va  ularda  oqsil  miqdori  hamda  ferment  faolligi  ko`rsatkichlari 

aniqlanadi. 

 

Geksokinaza  faolligi  kuzatilgan  fraksiyalar  birlashtiriladi  va  yana  qaytadan 

DEAE-sellyulozada  xromotogafiya  (rexromotogafiya)  qilinadi.  Buning  uchun  1,4x15 

sm  li  kolonka  tayyorlanib,    fosfat  buferi  (reaktivlar  ro`yxatida  2-turgan)  ning 

tarkibida    0,3  M  KCl  bo`lgan  chiziqli  gradiyentli  eritmasidan  foydalanib,  elyutsiya 

o`tkaziladi.    Elyutsiya  tezligi  35  ml/soat  ni  tashkil  qiladi.  Fraksiyalarni  4  ml  hajmdan 

yig`iladi  va ulardagi  oqsil miqdori hamda fermentativ  faollik  aniqlanadi. 

 

Fermentativ  faollikni  namoyon  qilgan  fraksiyalar  yi`gib    olinadi.  Olingan  oqsil 

eritmasini  dializlagandan  so`ng  liofilizatsiyalash  mumkin.  Bu  liofillangan  enzim  ikki 

xil  izoenzimdan  iborat  bo`ladi.  Bu  izoenzimlarni  ajratish  uchun  qo`shimcha  ravishda 

---

 

- 30 - 

KM-sellyulozada  va  qaytadan  DEAE-sellyulozada  xromotogafiya  o`tkazish  lozim 

bo`ladi.