Mikrobiologiya va

Uslubiy ko‘rsatmalar
T va В limfotsitlarga baho berishda tekshiruv obyekti limfotsitlar hisoblanadi. Shuning uchun limfotsitlaming toza populyasiyasini ajratib
olish muhim ahamiyatga ega.
Limfotsitlami fikoI-verografin zichligi gradiyentida ajratib olish.

1. 
   Tekshirish uchun tirsak venasidan qon (2-5 ml), ivib qolmaslisd uchun geparin (25 birl/ml) qo^;shilgan probirkaga olinadi. Olingan geparinli qonni 199 muhitda 2-3 marotaba suyultirish mumkin.
   
2. 
   Geparinli qon probirkaga olingan (1-1.5 ml) fikol 1-verografin
   

170




zichligi gradi\entiga (1.077) sekin-asta probirka devori bo'ylab qatlamlashtiriladi. Gradiyent zichlik bilan qon o'rtasidagi nisbat 1:3 teng bo'lishi kerak.

3. 
   Probirka 1500 ayln/daqiqa 30 daqiqa sentrifuga qilinadi.
   
4. 
   Halqa hosil qilib interfazada qolgan limfotsitlami paster pipetkasi bilan olinib ikki marotaba 199 muhitida 800 ayln/daqiqa 10 daqiqa sentrifugada yuviladi.
   

Limfotsitlar Goryaev kamerasida sanaladi va ularning konsentratsiyasi I ml da 2 mln. hujayraga yetkaziladi.
Limfotsitlami ishlatishdan oldin ularning yashash faoliyati o'rganiladi. Buning uchun limfotsit suspenziyasi Paster pipetkasida buyum oynasiga bir tomchi olinib. uning ustiga 1% tripan ko'kining eritmasi tomiziladi va ustiga yopqich oynacha qo'yilib 2—3 daqiqa dan keyin mikroskopda limfotsitlar 100 tagacha sanalib chiqiladi (oigan limfotsitlar ko'k rangga bo'yaladi). Tirik limfotsitlar 95% kam bo'lmasligi kerak.