MİNİstrliGİ qaraqalpaq ma’mleketlik universiteti
Download 5.81 Kb. Pdf ko'rish
|
- Bu sahifa navigatsiya:
- 2. Bakteriya klonları h’a’m shtammların alıw
- 3. Transformatsiya h’a’m transduktsiya h’a’diysesi
- . Transpozonlar h’aqqında tu’sinik
- 5. Plazmidler, restriktazalar
- L E K 5s İ Ya № a’n’ O’simlikshilikte gen injenerligi. Jobası`
- . O’simlikler gen injenerligi ushın vektorlar
- 58-plazmidler tiykarındag’ı vektorlar
- Aralıq h’a’m binar vektorlar
- O’simliklerdin’ DNK tutıwshı virusları tiykarındag’ı vektorlar
- 2. Xloroplast, mitoxondriya DNK ları tiykarında chelnok vektorlar jaratıw
- 3. O’simlikte tuwrıdan-tuwrı genlerdi o’tkiziw usılları
- Liposomag’a jaylastırıw usılı
- Biologiyalıq ballistikalar usılı
L E K 5s İ Ya № a’g’ Gen injenerligi tiykarları Jobası` 1. Gen injenerligi. 2. Bakteriya klonları h’a’m shtammların alıw. 3. Transformatsiya va transduktsiya xa’diysesi. 4. Transpozonlar xaqqında tu’sinik. 5. Plazmidler, restriktazalar. 6. Juwmaqlar. 1. Gen injenerligi. Biologiyada jan’a bag’dar - gen injenerliginin’ payda bolıwı 1o72-jılı Berg laboratoriyasında DNKnın’ rekombinant molekulası sintez etiliwi menen baylanıslı. Ullı biologlar A.A.Baev, A.N.Belozerskiy, Eyveri, G.Gamov, K.Koran, F.Jakob, J.Mono, Bekvist, G.A.Ovchinnikov, A.S Spirin, R.V.Petrov h’a’m basqalar ta’repinen genlerdi ajratıw, o’simlik, bakteriya h’a’m h’ayvon organizmlerinen DNK alıw, genetik kodtın’ oqılıwı, prokariotlar genlerinin’ ekspressiyası mexanizmının’ ashılıwı sıyaqlı juısları gen injenerliginin’ rawajlanıwında u’lken a’h’miyetke iye boldı. Gen injenerligi - genler u’stinde h’a’r qıylı protseduralar o’tkeriw, olardı tolıq u’yreniw tiykarında~ funktsional bo’limlerge bo’liw, kerekli ornının kesiw, kerek bolmag’an bo’limin alıp taslaw, kerekli bo’limlerin basqa genlerden yaki sintez jolı menen alıp jalg’aw h’a’m usı usılda tayarlang’an gibrid yaki rekombinant gendi belgili organizmge kirgizip (mısalı, adamnın’ insulin genin mikrob kletkag’a yaki tıshqannın’ o’siw gormonının’ genin alaman tıshqang’a za’rur turlerdi yamasa preparatlardı sintez qılıw h’a’m t.b. ideyalar h’a’m texnologiyalardın’ jıyındısı bolıp tabıladı. Genetikalıq injeneriyanın’ izertlew obektleri viruslar, bakteriyalar, zamarrıqlar, h’aywan h’a’m o’simliklerdin’ kletkaları esaplanadı. Bul tiri organizmlerdin’ (mabjudotlar) DNK molekulası kletkanın’ basqa zatlarınan tazalanıp alıng’annan keyin olar arasındag’ı materiallıq (moddiy) parıq jog’aladı. Tazalang’an DNK molekulası enzimler qatnasında (vositasida) spetsifikalıq bo’leklerge ıdırawı h’a’m qaytadan bul bo’lekler jalg’awshı enzim qatnasında talapqa say ta’rizde jalg’anıwı mu’mkin. Ha’zirgi zaman genetikalıq injeneriyası usılları ja’rdeminde probirkada h’a’r qanday DNK molekulası bo’legin ko’beytiriw, yamasa DNK shınjırındag’ı qa’legen nukleotidti basqası menen almastırıw mu’mkin. Tiri organizmler na’sillik xabardı jasalma jol menen belgili maqsetke muwapıq o’zgertiw qubılısı genetik injenerlik iliminin’ tiykarg’ı ustqurması esaplanadı. Genetik injenerlik kletka, xromosoma h’a’m gen da’rejesinde a’melge asırıladı. Kletka da’rejesindegi genetik injenerlik eki kletkanı o’zara qosıw jolı menen iske asırıladı. Xromosoma da’rejesindegi genetik injenerlik kletka yadrosına qosımsha xromosomalar kirgiziw arqalı a’melge asırıladı. Gen da’rejesindegi genetikalıq injeneriya yamasa gen injenerligi en’ quramalı bolıp, to’mendegi basqıshlar tiykarında a’melge asırıladı` 1. №ımbatlı xojalıq a’h’miyeti ka’sb etetug’ın gen funktsiyası arqalı izlep tawıladı, ajıratıp alınadı, klonlanadı h’a’m du’zilisi u’yreniledi. 2. Ajıratıp alıng’an gen xromosomada DNKsı menen rekombinatsiyalanıwshı bir fag genomı, transpozan yaki plazmid DNK menen biriktirilip vektor konstruktsiya jaratıladı. 3. Vektor konstruktsiya transformatsiya usılı menen kletkag’a kiritiledi h’a’m transgen kletka alınadı. Transgen kletkadan jasalma ra’wishte jetisken o’simlik o’siriledi. Usı usıldan paydalanıp o’simlik, h’aywan h’a’m mikroorganizmler kletkalarınan transgen formalar alıw mu’mkin. Gen injenerligi biotexnologiyasının’ jetiskenlikleri sanaat ko’leminde h’a’m awıl xojalıg’ında ken’nen qollanılmaqta. Antibiotikler, aminokislotalar, vitaminler h’a’m gormonlar islep shıg’arılmaqta, na’sildar qaramal klonları jaratılmaqta, topıraqta h’a’m suwda za’h’a’rli pestitsid qaldıqların parshalaytug’ın mikroorganizmlerdi transgen shtammaları alınbaqta, atmosfera azotını o’zlestiriwshi mikroorganizmler genler tiykarında topıraqtı azotlı to’ginler menen bayıtıw mashqalası sheshilmekte, zıyanlı nasekomalarg’a h’a’m patogen mikroorganizmlarge shıdamlı, ekologiyalıq teppe-ten’likti saqlawshı transgen o’simlik sortları jetistirilmekte, irsiy keselliklerge 48 tez diagnoz qoyıw ushın diagnostika ml ar tayarlanbaqta, sonday aq gen terapiya takomillashtirilmoqta. 2. Bakteriya klonları h’a’m shtammların alıw. Bakteriya klonları h’a’m shtammlardı alıw qa’dim zamanlarda aq insan o’mirinin’ protsessleri tiykarında an’sız ra’wishte su’tten qatıqtın’, biydaydan biza h’a’m qamır drojjı h’a’mde miywe sharbatınan sharap yaki sirke tayarlaw texnologiyasınan paydalang’an. Biraq bul o’nimler mikroblar yaki bakteriyalar qatnasında payda bolatug’ının bilmegen. Tanıqlı frantsuz alımı Lui Paster ta’repinen pasterizatsiya usılının’ jaratılıwı (su’t yaki miywe sogının’ 100 -50°S qızdırıw jolı menen olardı ashıtıw protsessinen azat qılıw pasterizatsiya dep ataladı.) biotexnologiyada mikroorganizmlerden an’lı ra’wishte paydalanıwg’a tiykar saldı. Paster o’zinin’ keyingi ta’jriybelerin bakteriyalardı klonlawg’a bag’ıshladı Bakteriyalardı klonlaw to’mendegishe a’melge asırıladı. Jasalma suyıqlıq azıqlıqta o’sip atırg’an bakteriya steril sharayıtta agar-agar zatları menen aralastırılg’an qattı jasalma azıqlıq betine o’tkiziledi. №attı agar-agar betine tu’sken h’a’r bir bakteriya kletkası izbe-iz bo’line baslaydı. Na’tiyjede, bir ana kletkadan payda bolg’an bakteriyalar a’wladının’ koloniyası payda boladı h’a’m bul koloniya klon dep ataladı. Klon quramındag’ı h’a’r bir kletka barlıq na’sillik qa’siyetleri jag’ınan ana kletkag’a uqsas boladı. Klonnan ajıratıp alıng’an h’a’r bir kletka bo’lingende na’sillik belgileri o’zgermesten, a’wlad kletkag’a o’tedi. Biotexnologiya protsessinde tek maqsetke muwapıq qa’siyetlerge iye bolg’an bakteriya klonları tan’lap alınıp, ko’beytiriledi o’stiriledi h’a’m isletiledi. İnsaniyattın’ X8X a’sir ortalarına deyin bakteriyalar plastik o’zgeriwshen’, yag’nıy na’sil quwıwshılıq belgileri bolmaydı, dep esaplap kelingen. L.Paster bakteriyalardın’ h’a’r qıylılıg’ın, olarda na’sil quwıwshılıqtın’ barlıg’ın h’a’m olardın’ qa’siyetleri na’sillik belgilerine tolıq baylanıslılıg’ın, bakteriyalardı klonlaw usılın ashılıwı menen birinshi ma’rtebe ko’rsetip berdi. Tabiyatdag’ı bar mikroorganizmler maqsetke h’a’mme waqıttada mas kelebermeydi. İzertlewshiler belgili na’sillik belgige iye bolg’an bakteriya 10 shtammları (shtamm - na’sli o’zgergen klon) h’a’r qıylılıg’ın mutagen zatlarını qollaw na’tiyjesinde ko’beytiriledi, klonlaw arqalı selektsiya qıladılar. Bakteriya yaki zamarrıqlar na’sil quwıwshılıg’ının’ mutatsion o’zgeriwi olardın’ biologiyalıq qa’siyetlerini o’zgeriwge alıp keledi. Bunın’ sebebi, kletkada keship atırg’an bioximiyalıq protsessler h’a’r bir basqıshtı bo’lek genlar ta’repinen basqarılıwındadur. Eger genlerdin’ nukleotidler izbe-izligi sırtqı qolaysız faktorlar ta’sirinde o’zgerse, bul genler sintez qılıp atırg’an fermentlerdin’ aktivivligi de o’zgeredi. Mutatsion protsess mutagen zatlardı yaki rengen h’a’m ultrafiolet nurlar ta’sirinde bir neshe ju’zlep ma’rte asıwı mu’mkin. Klonlaw usılı menen mutant shtammlardın’ maqsetke muwapıqları selektsiya qılınadı h’a’m biotexnologiyalıq maqsetlerde paydalanıladı. Son’g’ı jıllarda gen injenerligi usılı menen qa’legen gennin’ qa’legen nukleotidin almastırıw biotexnologiyası islep shıg’ıldı. Ha’zirgi ku’nde bul usıl rawajlantırılmaqta. Bul usıl jo’neltirilgen mutatsiya dep ataladı. 3. Transformatsiya h’a’m transduktsiya h’a’diysesi. Transformatsiya xa’diysesinin’ ashılıwı gen injenerligi biotexnologiyasında jan’a bir eranı baslap berdi. Bul h’a’diyse 1o28-jıl F.Griffit ta’repinen ashılg’an. Transformatsiya protsessi to’mendegishe ta’rip beriw mu’mkin. Belgili sharayıtta bir organizm na’sillik molekulası h’a’r qanday bo’leginin’ ekinshi organizmnin’ na’sillik molekulasının’ quramına birigiw h’a’diysesine transformatsiya dep ataladı. Gen injenerligi usılı menen organizmnin’ na’sillik belgilerin o’zgertiriwde transformatsiya ken’ qollanıladı. Griffitt transformatsiya protsessini o’z ta’jriybesinde to’mendegishe ta’ripleydi. Patogen pnevmokok bakteriyası (S shtamm) menen zıyanlang’an tıshqan o’ledi. usı bakteriyanın’ patogen bolmag’an shtammı (4 shtamm) menen zıyanlang’an tıshqan h’a’m qızdırıw jolı menen o’ltirilgen bakgeriyanın’ patogen shtammı menen zıyanlang’an tıshqan tiri qaladı. O’ltirilgen S shtammı tiri 4-shtammı menen aralastırılıp tıshqang’a jiberilgende tıshqan o’lgen. Onın’ qanında S-shtammı tawılg’an. Bunnan ko’rinip turg’anınday, o’ltirilgen S-shtammı na’sillik molekulasındag’ı kesellik shaqırıwshı gen tiri 4-shtammının’ na’sillik belgileri quramına o’tgen h’a’m onın’ na’sillik belgileri S-shtammına ta’n o’zgertirilgen, yag’nıy transformatsiya qılıng’an. Transformatsiya h’a’diysesi bakteriya h’a’m olardın’ faglar ortasında payda boladı. Arnalg’an du’ziliske iye bolg’an DNK bo’leginin’ xromosoma menen birigiw h’a’m onnan ajıralıp shıg’ıw protsessi transduktsiya dep ataladı. Transduktsiya A№Sh alımı Lvov ta’repinen 1o5e-jılda ashılg’an. Bulashılıwg’a shekem bakteriya kletkasına faglar (viruslardın’ bakteriya kletkasındag’ı ko’beyetug’ın tu’ri kirgende 49 olardın’ kletkada kobeyiwi aqıbetinde bakteriya jarılıp o’liwi belgili edi. Fag penen zıyanlang’an bakteriya koloniyası jog’aladı, yag’nıy lizis boladı. Usı sebepli bul protsess faglardın’ litik reaktsiyası dep ataladı. Lizis payıtında fag benen zıyanlang’an bakteriya kletkalarının’ ayırımları apatdan qutılıp qalıwı baqlang’an. Bunday kletka ishine tu’sken fagtin’ na’sillik molekulası bakteriya xromosomasının’ arnalg’an nukleotidleri izbe-izligin kesip, birigiwi na’tiyjesinde aktiv h’alatdan ko’beye almaytug’ın, yag’nıy bakteriyanı lizis qıla almaytug’ın aktiv emes profag h’alatına o’tedi. Bunın’ na’tiyjesinde bakteriya kletkası apattan qutıladı. Apattan qutılg’an bakteriya lizogen bakteriya, bu protsess bolsa lizogen reaktsiyası dep ataladı. Lizogen bakteriyadan spontan ra’wishte, yag’nıy o’z-o’zinan yaki fizikalıq-ximiyalıq ta’sirler na’tiyjesinde fag na’sillik molekulası ajıralıp shıg’ıp, ortalıqtag’ı basqa bakteriyalardı zıyanlantıradı h’a’m aqırında, olardı o’tiredi yaki ayırım h’allarda bakteriya xromosoması menen birigip profag h’alatına o’tedi. Transduktsiya protsessinde E.col8 bakteriya xromosoması 1 fag na’sillik molekulaları o’zara baylanısıwı yaki rekombinatsiyalanıwı molekulyar jag’ınan to’mendegishe keshedi. Biraq usını aytıp o’tiw kerek, fag transduktsiyası barqulla bul da’rejede anıq, a’melge aspaydı. Profag h’alatında Ya, fag bakteriya genomınan ayırım genlerdi h’a’tte q ta struktura gen h’a’m promotordan ibarat laktoza operonini (operon - o’zara baylanıslı h’alatda transkriptsiyalanıwshı h’a’m regulyator element ja’rdeminde kontrol qılınıwshı genlar izbe- izligi biriktirilgen h’alda ajıralıwı baqlang’an. Bunday rekombinant X fag benen E.col8 din’ lac shtammı, yag’nıy laktozanı parshalawshı geni mutatsiya na’tiyjesinde islemeytug’ın shtammı zıyanlantırılsa, transduktsiya na’tiyjesinde lac shtamm lizogen lac + shtammga aylanadı. Demek fag lac + shtammdan laktoza parshalawshı operonni lac-shtammga transduktsiya qıladı. Fag na’sillik molekulasında bakteriya xromosomasını nukleotidler izbe-izligin anıq, tanıp jabısqaq ushlar payda qılıp,kesiwshi) integraza fermentinin’ genleri bar. Usı ferment ja’rdeminde fag na’sillik molekulası bakteriya xromosomasına ornalasadı h’a’m DNK-ligaza fermenti ja’rdeminde onın’ quramlıq bo’limi sıpatında tola birigedi. 4. Transpozonlar h’aqqında tu’sinik. Ko’ship ju’riwshi genetikalıq elementler- transpozonlardı o’simlik organizminde A№Sh alımı Barbara Mak Klintok, mikroorganizmlerde A№Sh alımı Axmad Buxoriy h’a’m nasekomalarda Rossiya alımı Georgiy Georgiev ashqan. Ko’ship ju’riwshi genetikalıq elementler bul waqıtta transpozitsion elementler yaki transpozonlar dep te ataladı. Transpozonlar h’a’r qıylı strukturag’a iye bolsalarda, barlıq transtyuzon molekulalardın’ eki shetinde arnalg’an nukleotidler (izchildigi,) oraylıq bo’limde bolsa DNK molekulasının’ belgilengen jayında jabısqaq ushlar payda etip tegis emes kesiwshi transpozaza fermentini sintez qılıwshı gen bar. Transpozaza fermenti kletkadag’ı DNK molekulasını jabısqaq ushlar payda qılıp kesedi h’a’m sol waqıtta transpozon ushlarına qawıstırıladı. Payda bolg’an xromosoma DNKsı h’a’m transpozon DNK sınan ibarat qosılma kletka DNK bo’leklerini baqlawshı ferment ligaza ta’sirinde o’zara baylanadı. Transpozonlardın’ kletka DNK sına integratsiyası to’mendegishe a’melge asadı. Transpozonlar xromosomada o’z ornın o’zgertkende na’sillikte o’zgeredi. !detde, jasaw ortalıg’ı keskin o’zgergende transpozonlardın’ ko’ship ju’riwi artadı. Sol sebepli ko’ship ju’riwshi genetikalıq elementler qatnasında gen injenerligine tiykarlang’an ko’plegen biotexnologiyalıq protsessler jaratılg’an. 5. Plazmidler, restriktazalar. Bakteriya h’a’m to’men eukariot organizmler kletkalarda tiykarg’ı xromosomadan sırtta, kishkene o’lshemge iye bolg’an qalqan sıyaqlı yaki sızıq sıyaqlı strukturag’a iye bolg’an qosımshalar xromosomalar barlıg’ın bul mini-xromosomalar plazmidler dep ataladı. Plazmid DNK ası ko’bi menen e-10 deyin genlerdi o’zinde saqlaydı. Bul genler, tiykarınan antibiotik yaki za’h’a’rli toksinlerdi parshalawshı fermentlerdin’ sintezine juwapker. Sol sebepli plazmidler bakteriya, ashıtqı h’a’m zamarıqlar antibiotik h’a’m za’h’a’rli toksinlerge shıdamlılıg’ın ta’miynleydi. Plazmidtin’ antibiotik parshalawshı genleri bir plazmidten ekinshisine transpozonlar menen birikken h’alda h’a’m ko’ship ju’re aladı. Bul molekulyar protsess kesel shaqırıwshı mikroblardın’ antibiotiklerge shıdamlılıg’ın ju’da’ asıradı. Plazmidler o’z qa’siyetlerine ko’re ekige bo’linedi. Birinshisi transpozon yaki bakteriofag na’sillik mo- lekulası sıyaqlı kletka tiykarg’ı xromosomanın’ arnalg’an DNK izbe-izligin kesip, rekombinatsiya bola alatug’ın plazmidler. Bunday rekombinatsiyalanıwshı plazmidler transmissibl, yag’nıy na’silden-na’silge o’tiwshi plazmidler dep ataladı. Transmissibl plazmid tiykarg’ı xromosomag’a birikkennen keyin o’z g’a’rezsizligin jog’altadı. Tiykarg’ı xromosomadan g’a’rezsiz ra’wishte o’z-o’zini replikatsiya qıla almaydı. Aynı payıtda bunday plazmidlerde jaylasqan genler tiykarg’ı xromosomada o’z xızmetin bejeredi. Kletka bo’lingende rekombinatsiyalanıwshı plazmid genleri tiykarg’ı xromosoma genleri birikken h’alda na’silden- na’silge beriledi. Ekinshi turdegi plazmidler avtonom h’alda replikatsiyalanıwshı plazmidler dep ataladı. Bunday plazmidler tiykarg’ı xromosomag’a birige almaydı, tiykarg’ı xromosomalardan 50 g’a’rezsiz ra’wishte o’z-o’zini replikatsiya jolı menen onlap h’a’m h’a’tte ju’zlep ma’rte ko’beytire aladı. Avtonom plazmidler bakteriya yaki zamarıq kletkaları bo’lingende qız kletkaları arasında birden bolg’an ra’wishte taqsımlanadı. Usının’ menen birge avtonom plazmid bir kletkadan ekinshisine kletka qabıg’ı h’a’m membranasının’ tesiklerinen o’te aladı. Tabiyatda birar mikroorganizm kletkasına sırttan jat genetikalıq material kirse, ol darxal kletka nukleaza fermentleri arqalı ıdıratıp taslanadı. DNK molekulasını mayda bo’leklerge bo’liwshi fermentler endonukleazalar yaki restriktazalar dep ataladı. Ha’r bir restriktaza (gurt) yaki ko’plew arnalg’an nukleotid jupların tan’lap alıp baylanadı h’a’m DNK molekulasını kesedi. Ayırım restriktazalar DNK qos shınjırın qıyshı sıyaqlı sharta eki bo’lekke bo’ledi. Bunday restriktazalarg’a Al7 8, D4a 8, Hae 888, Hpa 8, Eco4 V, H8nc 88, Pv7 J8, 4sa 8, Sea 8, Sma 8 h’a’m basqaların mısal qılıp keltiriw mu’mkin. Usının’ menen birge qos shınjırı DNK molekulasını jabısqaq " ushlar payda qılıp kesiwshi restriktazalar da bar (Aa5 88, Asc 888, Ara 8, Bam H8, Eco48, H8nd 888 h’a’m basqalar). Bul restriktazalar funktsiyası jag’ınan transpozazag’a uqsaslıg’ı ko’rinip turıptı. Sonın’ ushın da bul restriktazalar payda qılg’an jabısqaq " ushlardan paydalanıp, h’a’r qıylı DNK bo’leklerini bir - birine baylaw an’satlasadı. Mine usınday qa’siyetleri sebepli bul tu’r restriktazalar gen nijenerliginde ken’ qollanıladı. Ha’zirgi ku’nge deyin 500 den artıq h’a’r qıylı restriktazalar tazalanıp alıng’an h’a’m u’yrenilgen. !dette, mikroorganizm na’sillik xromosoması bir neshe million nukleotid jupları izbe- izliginen ibarat. O’simlik yaki h’aywan genomı bir neshe ju’z millionnan 1 milliardg’a deyin nukleotid jupları izbe-izliginen du’zilgen. Bunday ullı molekulanı joqarıda atap o’tilgen h’a’r qıylı restriktsion endonukleazalardan paydalanıp, ko’p bo’leklerge bo’liw mu’mkin. Endonukleaza qatnasında parshalang’an DNK bo’lekleri elektroporez maslamasında arnalg’an molekulyar "elek" tesiklerinen joqarı kushtegi elektr maydanı ta’sirinde molekulanın’ zaryadı h’a’m o’lshemine qaray ajıratıladı. DNK bo’legi arnalg’an boyaw menen boyaw na’tiyjesinde ultrafiolet nurları ja’rdeminde a’piwayı ko’z benen ko’riledi. DNK nın’ mayda bo’leklerge elektr maydanında gel qabaqlarınan u’lken bo’leklerge salıstırg’anda tez h’a’reket qılg’anı ushın olardın’ starttan basıp o’tken aralıqtı o’lshep DNK bo’leginin’ u’lken-kishiligi anıqlanadı. Elektroforez maslamasında bir-birinen tek bir nukleotid kem yaki ko’pligi menen parıqlanıwshı DNK bo’legini ajıratıw mu’mkin. Restriktsion endonukleaza fermentlerinin’ ashılıwı h’a’m elektrodrorez maslamasında DNK bo’leklerin o’te anıqlıq benen bir-birnen ajıratıwdın’ rawajlandırılıwı gigant DNK molekulasında qa’legen DNK bo’legini ajıratıp alıw imkaniyatın beredi. y. Juwmaqlar. Ulıwma aytqanda gen injenerligi usılları tiykarında transgen o’simlik H ’ A ’ M h’aywanlar alıw mu’mkin. Bul usıl menen qımbatlı xojalıq a’h’miyetine iye bolg’an bir qatar o’simlikler h’a’m na’sildar qaramal klonların jaratıw mu’mkin. Gen injenerligi biotexnologiyasının’ materiallıq tiykarlarına bakteriyalardın’ klonlaw, transformatsiya h’a’m transduktsiya protsessleri, transpozonlar, plazmidler h’a’m restriktsion endonukleaza fermentlerini tolıq fundamental tiykarların u’yreniw kiredi. Joqarıda aytıp o’tilgen biologiyalıq aktiv zatlar gen injenerligi biotexnologiyasının’ a’meliy protsesslerinde ju’da’ qımbatlı faktor esaplanadı. SORAWLAR: 1. Gen h’a’m kletka injenerligi a’h’miyeti h’a’m tiykarg’ı wazıypaları ne? 2. Gen kletka h’a’m xromosoma da’rejesindegi gen injenerliginin’ parqı nede? 3. Klon dep nege aytıladı? 4. Shtammnın’ klonnan parqı tu’sindirip berin’? 5. Transpozonlar ne? 6. Transpozon molekulalarının’ kletka na’silligine ta’sirini tu’sindirip berin’? 7. Plazmidlerdin’ tiykarg’ı wazıypasın aytıp berin’? 8. Tiykarg’ı xromosoma menen rekombinatsiya bola alatug’ın rekombinatsiya bola almaytug’ın plazmidlerdi kletka na’silligine ta’sirini ximiyalıq jaqtan salıstırın’? 9. Restriktsion endonukleazalar h’aqqında tu’sinik berin’? L E K 5s İ Ya № a’n’ O’simlikshilikte gen injenerligi. Jobası` 1. O’simlikler gen injenerligi ushın vektorlar. 2. Xloroplast, mitoxondriya DNK lardan vektorlar jaratıwda paydalanıw. 3. O’simlik kletkasına tuwrıdan tuwrı genlerdi o’tkiziw usılları. 4. Juwmaqlar. 51 1. O’simlikler gen injenerligi ushın vektorlar. O’simliktin’ to’men temperatura, qurg’aqshılıq, topıraqtın’ shorlıg’ı, sırtqı stress ta’sirler, zıyankeslerdin’, gerbitsid h’a’m pestitsidlar, tu’rli keselliklerge shıdamlılıq, tez piserlik qa’siyetlerine iye bolıwı maqsetke muwapıq boladı. Bunın’ ushın usı qa’siyetlerge tiyisli genlerdi klonlap olardı o’simliklerdin’ kletkasına kirgiziw h’a’m olardın’ ekspressiyasın a’melge asırıw, transformatsiyalang’an kletkalardı tan’law h’a’m kiritilgen qa’siyetlerinin’ na’silden na’silge beriliwin ta’miyinlewde evolyutsiya na’tiyjesinde payda bolg’an topıraq bakteriyalarının’ ta’biyg’ıy vektorlarınan paydalanıw joqarıdag’ı ta’shwishlerdi sheshiwde a’h’miyetli rol oynaydı. 58-plazmidler tiykarındag’ı vektorlar. Agrobakteriy gruppasına kiriwshi bakteriyalardın’ bazıları o’simliklerdi ziyanlap (za’h’a’rlep), isik shaqırıw qa’siyetine iye. İsikler differentsiyalanbag’an kletkalardan quralg’an bolıp zıyanlang’an orında intensiv bo’linedi h’a’m o’sedi. Derlik barlıq eki u’lesli o’simlikler bul bakteriyalarg’a ta’sirshen’ esaplanadı. O’simlik kletkası zıyanlang’annan son’ opinaminokislotasın sintez qılıp, onı bakteriya azot h’a’m uglevod deregi sıpatında paydalana baslaydı. İsik shaqırıwshı plazmidler 58-plazmid (57mo4 8nd7c8ng – isiktin’ payda bolıwın baslawshı) dep ataladı. Ol qalqan sıyaqlı molekula bolıp, o’lshemi shama menen 200 kb. Bakteriya kletkasında avtonom replikatsiyalanadı. Genetikalıq izleniwlerdin’ ko’rsetiwinshe, plazmidtin’ 58-bo’legi infektsiya payıtında xromosomag’a ornalasıp isik shaqıradı, 58-bo’leginde menshik promotorı menen regulyatsiyalanıwshı 7 genler jaylasqan. Bul genler opin sintezine h’a’m differentsirovkanının’ jog’alıwına juwapker esaplanadı. 58-plazmidinin’ biologiyalıq qa’siyetleri genlerdi ko’shirip o’tkiziliwinde vektor sıpatında paydalanıw imkanın beredi. Bul plazmid xromosoma quramına ornalasıp, replikatsiyalanadı h’a’m ayırım bo’limi translyatsiyalanıp belok sintez qıladı. Aralıq h’a’m binar vektorlar. Jat genlerdi o’simlik kletkasına kiritiwdin’ usıllarının’ biri bul aralıq vektorlardan paydalanıw esaplanadı. Bunda aldın T-DNK restriktazalar ja’rdeminde kesip alınadı h’a’m klonlanatug’ın vektor E.col8 (ma’selen pB4-qg’g’) quramına kiritilip ko’beytiriledi h’a’m T-bo’legi ishine jat gendi ornatıp ja’ne ko’beytiriledi. Son’ payda bolg’an rekombinant plazmidti T-plazmid tutıwshı A.57mefac8ence kletkasına kirgiziledi, ekilemshi krossengover na’tiyjesinde jat gen tutıwshı rekombinant plazmidtin’ T-DNK gomologiyalıq bo’legi 58-plazmidtegi normal T-DNK ornına jaylasadı. Aqırında, quramında jat genli 58- plazmid tutıwshı bakteriya menen o’simlik zıyanlantırıladı, na’tiyjede jat gen kiritilgen T-bo’legi bolg’an isik kletkaları alınadı. O’simliklerdin’ DNK tutıwshı virusları tiykarındag’ı vektorlar. Fitoviruslar tiykarınan genetikalıq xabar tasıwshısı sıpatında RNK tutadı. Tek g’ana a’-g’O’ viruslarda g’ana DNK tutıwshılırg’a kiredi. Usı viruslardan rekombinant DNK lar texnologiyasında h’a’m genlerdi o’simliklerge o’tkiziwde vektor sıpatında paydalanıw mu’mkin. Bul maqsette atanaq gu’lliler (butguldoshlar) semeystvosına kiriwshi o’simliklerdi zıyanlawshı gu’l kapusta mozaikasi virusı SaMV dan (ca7l8flove4 moza8c v847s) paydalanıw mu’mkin. Bul virus bo’leksheleri diametri shama menen 50 nm bolıp, uzınlıg’ı h’ kb bolg’an qalqan sıyaqlı DNK g’a iye. CaMV genomı kishkene o’lshemi 8n v854o virus DNK sı menen o’simlik japırag’ına ısqalap zıyanlaw jolı arqalı kletkag’a kirgiziw imkanın beredi. Bir neshe kletkanı zıyanlaw jolı menen pu’tkil bir o’simliktin’ zıyanlanıwına erisiw mu’mkin. CaMV DNK sın E.col8 da klonlaw ushın, E.col8 plazmid vektorınan PB4-e22 paydalanıladı. CaMV h’a’m E.col8 DNK sın sa’ykes restriktazalar menen islew beriw h’a’m ligirlew na’tiyjesinde E.sol8 da amplifikatsiya bola alatug’ın gibrid plazmid payda boladı. 2. Xloroplast, mitoxondriya DNK ları tiykarında chelnok vektorlar jaratıw. Xloroplast genomı qalqan sıyaqlı DNK molekulasınan ibarat bolıp, uzınlıg’ı a’g’0-a’n’0 kb. Xloroplast genomı replikatsiyası h’a’m transkriptsiyası avtonom ta’rizde boladı. Sonın’ ushın xloroplast DNK sınan vektor sıpatında paydalanıw mu’mkin. Bakteriya plazmidi, replikatsiya, initsiatsiya, transkriptsiya terminatsiyasi uchastkaları bolg’an xloroplast DNK sı bo’legi menen biriktirip, chelnok vektor jaratıwı mu’mkin. Bunday vektor prokariot kletkalarda replikatsiyalanadi, eukariot kletkalarda bolsa tek replikatsiyalanıwshı g’ana emes, al jat genetikalıq xabardın’ ekspressiyasında a’melge asırıw mu’mkin. Bular episomalar delinedi. Bunday vektorlardı jaratıwda uzınlıg’ı 1-50 kb mitoxondriya DNK molekulalarınanda paydalanıw mu’mkin. 3. O’simlikte tuwrıdan-tuwrı genlerdi o’tkiziw usılları. O’simlik protoplastları transformatsiyası. DNK nı tuwrıdan-tuwrı protoplastqa transformatsiya qılıw usılları islep shıg’ılg’an. Kaltsiy pretsipitatsiyası usılı h’a’m protoplastlardın’ bir birine qosılıwı usılı birgelikte jaqsı na’tiyje beredi. Transformatsiya ushın 52 h’a’r qanday DNK-vektordan paydalanıw mu’mkin. Bunda gibrid gen yadro DNK sına stabil integratsiya boladı h’a’m ekspressiyalanadı. Kokultivatsiya usılı. Bul usıl isiw (shish) toqımaların jasalma sharayatta induktsiyalawg’a tiykarlang’an. Aldın protoplast kulturası alınadı, son’, o’siwinin’ baslang’ısh stadiyasında yag’nıy protoplastlar kletka diywalın tiklep, bo’line baslag’annan son’ kultura agrobakgeriya menen zıyanlantırıladı. Transformantlar alıw waqıttı bul usıl ja’rdeminde q h’a’ptege qısqaradı. Sonday aq tiykar qılıp tek transformant kletkalardın’ fitogarmonsız ortalıqta o’siwi selektiv qa’siyet sıpatında alınadı. DNK mikroinektsiyası. Ta’jiriybelerdin’ ko’rsetiwinshe, mikroinektsiya usılın h’aywanlar mikroinektsiyası usılı sıyaqlı o’simlik kletkaları transformatsiyası ushın da tabıslı qollaw mu’mkin. Mikroinektsiya ushın sırtqı diametri 2 mkm, ishki diametri 1-1,5 mkm bolg’an iynelerden paydalanadı. Bul usıl ja’rdeminde o’simlik kletkasına transformatsiya alıng’an vektorg’a qaramastan na’tiyjeli shıg’adı. Mikroinektsiya o’simliklerdin’ h’a’mme tu’rleri ushın qollanıwı mu’mkin. Elektroporatsiya. Bu usıl joqarı ku’shleniw impulsı biomembranalardın’ o’tkiziwshen’ligin asırıwg’a tiykarlang’an. №uramında DNK bolg’an elektroporatsiya ortalıqta ko’p mug’dardag’ı o’simlik protoplastlarg’a joqarı voltlı impuls benen ta’sir ettiriledi. Na’tiyjede kletka tesikleri arqalı kletka membranasına DNK molekulaları kiredi. Son’ protoplastlar suyıltırılıp sa’ykes keletug’ın ortalıqqa egiledi. O’tkiziwdin’ na’tiyjesi 24-48 saattan son’ anıqlanadı. Liposomag’a jaylastırıw usılı - protoplastqa jiberiletug’ın ekzogen genetikalıq materiallardı nukleazalardan qorg’awda isletiletug’ın usıl bolıp, liposoma - spetsifik (xosila) payda bolıp, qabıg’ı fosfolipidlerden quralg’an. Fosfolipidtin’ suwlı emulsiyasın ultradawıs benen islew berip yaki tez shayqatıw usılı menen alıw mu’mkin. Haywan h’a’m o’simlik kletkalarına DNK nı jiberiwde fosfatilserin yamasa xolesterinnen quralg’an liposomalar maqsetke muwapıq. Biologiyalıq ballistikalar usılı. Bir u’lesli o’simliklerge transformatsiyalawdın’ h’a’zirgi ku’ndegi en’ na’tiyjeli usıllarınan biri bul biologiyalıq ballistikler (biolistikler) usılı esaplanadı. Baslang’ısh material sıpatında suspenziyalı kultura, kallus yaki bir u’leslilerdin’ (pallalilarning) kulturada o’sip atırg’an 4-5 ku’nlik bu’rtigi (murtagi) alınadı. Bul usılda, quramında DNK bolg’an volframnın’ mayda bo’leksheleri gennin’ transformatsiyası ushın za’ru’r bolg’an gen konstruktsiyası DNK-vektorına bu’rkiledi. DNK tutıwshı volfram bo’leksheleri tsellofan to’sekke (taglikga) ornatılıp, biolistik pushka ishine jaylastırıladı. Petri chashkasındag’ı agarlı ortalıqtag’ı kallus yamasa kletkalar suspenziyası biolistik pushka astına 10-15 sm aralıqqa qoyıladı. Pushka menen volfram bo’leksheli DNK basım astında atılg’anda kletka diywalları jarılıp, tsitoplazma h’a’m yadrog’a kiredi. !dette, oraydag’ı kletkalar nabıt boladı, a’tiraptag’ı na’tiyjeli transformatsiya bolg’an kletkalar regeneratsiyalanıwı ushın taza azıqlıq, ortalıg’ına ko’shirip o’tkiziledi. Ballistik pushka ja’rdeminde ju’weri, salı, biyday sıyaqlı bir u’lesli o’simlikler transformatsiyalanıp transformant o’simlikler alıng’an. 4. Juwmaqlar. Juwmaqlastırıp sonı aytıw mu’mkin yag’nıy o’simliklerdin’ gen injenerliginde agrobakteriumnın’ 58 plazmidinin’ a’h’miyeti u’lken. Agrobakteriya derlik barlıq eki u’lesli o’simliklerdi zıyanlap isik (shish) shaqıradı. Agrobakteriydegi usı isik (shish) shaqırıw qa’siyetin jog’altıp onnan paydalı genlerdi o’simliklerge o’tkiziwde vektor sıpatında paydalanıw mu’mkin. Genlerdi transformatsiya qılıwda o’simliklerdin’ DNK tutıwshı virusları, o’simliklerdin’ xloroplast h’a’m mitoxondriya DNK larınan vektor sıpatında paydalanıw mu’mkin. Genlerdi tuwrıdan-tuwrı o’simlikke o’tkiziwdin’ bir neshe usılları jolg’a qoyılg’an. Bularg’a o’simlik protoplastları transformatsiyası usılı, kokultivatsiya usılı, DNK mikroinektsiyası, elektroporatsiya usılı, liposomalar ja’rdeminde, biologiyalıq ballistika usılları ja’rdeminde awıl xojalıg’ı ushın qımbatlı bolg’an genlerdi o’simlik kletkasına o’tkizip jan’a qa’siyetke iye o’simlikler alıw mu’mkin. SORAWLAR` 1. O’simlikler qaysı qa’siyetine iye bolıw maqsetke muwapıq? 2. №aysı bakteriya plazmidlerinen o’simlikler gen injenerliginde vektor sıpatında paydalanıw mu’mkin? 3. Aralıq h’a’m binar vektorlar degende neni tu’sinesiz? 4. O’simlikler gen injenerliginde qanday viruslardan paydalanıw mu’mkin? 5. Kletka organellalarının’ qaysı biri vektor rolin bejeriwi mu’mkin? y. O’simliklerge tuwrıdan-tuwrı genlerdi o’tkiziwdin’ qanday usılların bilesiz? Download 5.81 Kb. Do'stlaringiz bilan baham: |
Ma'lumotlar bazasi mualliflik huquqi bilan himoyalangan ©fayllar.org 2024
ma'muriyatiga murojaat qiling
ma'muriyatiga murojaat qiling