Microsoft Word 60 2012 Белясова doc

Идентификация генов по изменению фенотипа клеток. Этот 
метод чаще используется при «самоклонировании», т. е. при переносе 
генов на многокопийных плазмидах в тот же микроорганизм, из гено-
ма которого были выделены эти гены. Например, требуется обнару-
жить в клонотеке E. coli клоны, содержащие гены, ответственные за 
биосинтез аланина. Для этого требуется перенести векторы с клони-
рованными фрагментами ДНК в мутантные штаммы E. coli, зависи-
мые по аланину. Отбор потомства следует вести на синтетической 
среде без аланина, где способны сформировать колонии лишь те бак-

---

104 
терии, которые восприняли комплементирующий соответствующую 
мутацию ген. Подобная процедура носит название «тест на компле-
ментацию» и требует наличия штаммов с хорошо охарактеризован-
ными мутациями искомых генов. 
Иммунологический скрининг продуктов генов. Если фрагмен-
ты ДНК клонировались в составе экспрессируемых векторов, обеспе-
чивающих транскрипцию и трансляцию чужеродных генов, то возмо-
жен отбор нужных клонов с помощью иммунологических тестов. Для 
этого колонии бактерий на плотной среде (чашка-реплика) подверга-
ют лизису парами хлороформа, а затем методом реплик переносят со-
держимое на поливиниловую пластинку, на которой адсорбированы 
антитела к искомому белку. Промывают пластинку таким образом, 
чтобы на ней остались только связанные с антителами белки (в мягких 
условиях). Затем пластинку обрабатывают мечеными изотопами йода 
(
125
I) антителами к тому же белку. Таким образом, на пластине форми-
руется комплекс антигена (искомый белок) и двух молекул антител, 
одна из которых мечена радиоактивным изотопом. Обнаружить место-
положение такого комплекса можно радиоавтографически. Сопостав-
ляя положение меченого комплекса и колоний на чашке, можно вы-
явить клон, содержащий ответственный за синтез искомого белка ген.