Microsoft Word 60 2012 Белясова doc

Детекция молекулярных маркеров с помощью ПЦР. ПЦР-
анализ широко применяется для характеристики индивидуальной гене-
тической вариабельности. Среди этих методов наиболее известны та-
кие, как метод определения полиморфизма длин амплифицированных 
фрагментов (ПДАФ, или АFLP), а также метод SNP (Single nucleotide 
polymorphism), который нашел применение в фармакогеномике. 

---

122 
2.7. Направленный мутагенез и белковая инженерия 
Методы генетической инженерии, в частности клонирование инди-
видуальных генов или их частей, а также секвенирование ДНК, позво-
лили значительно усовершенствовать методологию мутагенеза, устра-
нив основные недостатки классических способов индукции мутаций в 
геномах. Классический генетический анализ предполагает воздействие 
мутагенного фактора in vivo на целый геном, в результате чего в нем 
возникают случайные мутации, зачастую множественные, что сильно 
осложняет идентификацию мутантов. Выявление мутантных особей 
осуществляют по измененным фенотипическим признакам, а природу 
мутации можно определить после секвенирования ДНК. Современный 
направленный мутагенез, по сути, предполагает обратные действия: 
вначале клонируют интересующий ген или его сегмент, определяют его 
структуру в ходе секвенирования, а на ее основе – аминокислотную по-
следовательность белка. Потом in vitro вносят требуемые изменения в 
состав гена. Поскольку в данном случае мутагенезу подвергают только 
строго определенный локус, а весь геном не изменяется, такой мутагенез 
называют еще локализованным. Последствия вызванной мутации опре-
деляют после введения мутантного гена в исходный организм. 
Самый простой вариант локализованного мутагенеза состоит в 
обработке клонированного фрагмента ДНК одним из мутагенных фак-
торов (статистический и сегмент-направленный мутагенез), од-
нако результатом такого воздействия будут тоже случайные измене-
ния в структуре фрагмента. Более надежные и чаще применяемые ме-
тоды направленного мутагенеза осуществляются без использования 
мутагенных факторов, введением предопределенных мутаций в зара-
нее запланированное место (точку, сайт) изучаемого фрагмента ДНК 
(сайт-специфический мутагенез). Кроме этого, для получения деле-
ций и инсерций пользуются и классическими методами генетической 
инженерии, например использованием рестриктаз. 
Среди типов мутаций в направленном мутагенезе преобладают 
делеции, вставки и замены нуклеотидов.