Microsoft Word 60 2012 Белясова doc

Вставки (инсерции). Для получения инсерций клонированную 
ДНК расщепляют рестриктазой или неспецифической эндонуклеазой, 
а затем лигируют образующиеся фрагменты в присутствии сегмента, 
который хотят вставить в ДНК. Чаще всего в качестве таких сегмен-
тов используют синтезированные химическим путем полилинкеры. 
Инсерции, как и делеции, способны нарушить целостность гена 
или структуру его регуляторных областей, в результате чего будет 
синтезироваться дефектный белок (в случае протяженных делеций 
или сдвига рамки считывания, как правило, неактивный) либо будут 
наблюдаться изменения процесса транскрипции интересующего гена. 
Таким способом чаще получают регуляторные мутанты и конструи-
руют экспрессируемые векторы. 
Статистический (случайный) мутагенез in vitro. Этот тип мута-
генеза используется для более глубокого анализа организации гена 
(белка). Он является направленным лишь в том смысле, что воздей-
ствию мутагена подвергается определенный ген в составе вектора, но 
не его локус (сайт).
Проще всего большое разнообразие мутаций можно получить при 
общем мутагенезе гибридной ДНК, содержащей целевой ген. Основ-
ным недостатком данного подхода является то, что мутагенез затраги-
вает все генетические локусы обрабатываемой молекулы ДНК. По-
этому при увеличении глубины мутагенеза, т. е. при введении не-
скольких мутаций на молекулу, наряду с искомыми могут возникать 
мутации по жизненно важным функциям вирусной или плазмидной 
ДНК, которые могут перестать реплицироваться в клетках. При этом 
генетические локусы плазмид, важные для репликации, устроены 
проще и имеют небольшой размер по сравнению с фаговыми. Поэто-
му они повреждаются с относительно невысокой частотой. Вирусные 
геномы при мутагенезе чаще теряют жизнеспособность. 
Найдены оптимальные условия мутагенеза плазмидных ДНК in 
vitro. Так, высокую эффективность мутагенеза обеспечивают гидро-
ксиламин и О-метилгидроксиламин. Эти мутагены обладают высокой 

---

125 
специфичностью и взаимодействуют в основном с цитозином и на два 
порядка менее эффективно с аденином, причем действуют в участках 
с локальной денатурацией двуспиральной структуры ДНК. Поэтому 
воздействие этих мутагенов сочетают с повышением температуры, 
приводящим к большей «разрыхленности» двуспиральной ДНК.