Жиззах 2010 1-лабаратория машғулоти

Глюкозани мушак тўқимасида кислородсиз шароитда оксидланиши (гликолиз).
Глюкозанинг тўқималарда кислородсиз шароитда оксидланиши гликолиз дейилади. Оксидланиш субстрати гликоген бўлса, глокогенолиз дейилади. Одам ва хайвонлар организмида моносахаридларнинг анаэроб парчаланиш сут кислота хосил бўлиши билан тугайди. Ўсимликлар ва микроорганизмларда бу процессда этил спирти хосил бўлади:



Гликолиз процессида иштирок этадиган барча ферментлар ўсимликлардан топилган ва кўпчилиги соф холда ажратиб олинган.
Хагедорн – Иенсен бўйича глюкоза миқдорини ҳисоблаш учун жадвал

Гипосульфид, мл да	0,00	0,01	0,02	0,03	0,04	0,05	0,06	0,07	0,08	0,09
0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9	0,385 0,355 0,331 0,310 0,290 0,270 0,251 0,232 0,213 0,195 0,177 0,159 0,141 0,124 0,106 0,088 0,070 0,052 0,034 0,017	0,382 0,352 0,329 0,308 0,288 0,268 0,249 0,230 0,211 0,193 0,175 0,157 0,139 0,122 0,104 0,086 0,068 0,050 0,032 0,015	0,379 0,350 0,327 0,306 0,286 0,266 0,247 0,228 0,209 0,191 0,173 0,155 0,138 0,120 0,102 0,084 0,066 0,048 0,031 0,014	0,376 0,348 0,325 0,304 0,284 0,264 0,245 0,226 0,208 0,190 0,172 0,154 0,136 0,119 0,101 0,083 0,065 0,047 0,029 0,012	0,373 0,345 0,323 0,302 0,282 0,262 0,243 0,224 0,206 0,188 0,170 0,152 0,134 0,177 0,099 0,081 0,063 0,045 0,027 0,010	0,370 0,343 0,321 0,300 0,280 0,260 0,241 0,222 0,204 0,186 0,168 0,150 0,132 0,115 0,097 0,079 0,061 0,043 0,025 0,008	0,367 0,341 0,318 0,298 0,278 0,259 0,240 0,221 0,202 0,184 0,166 0,148 0,131 0,113 0,095 0,077 0,059 0,041 0,024 0,007	0,364 0,338 0,316 0,296 0,276 0,257 0,238 0,219 0,200 0,182 0,164 0,146 0,129 0,111 0,093 0,075 0,057 0,039 0,022 0,005	0,361 0,336 0,314 0,294 0,274 0,255 0,236 0,217 0,199 0,181 0,163 0,145 0,127 0,110 0,092 0,074 0,056 0,038 0,020 0,003	0,358 0,333 0,312 0,292 0,272 0,253 0,234 0,215 0,197 0,179 0,161 0,143 0,125 0,108 0,090 0,072 0,054 0,036 0,019 0,002

Иш тартиби.

1. 
   Ачитиш учун эритма тайёрлаш текширув ва назорат тажриба пробиркаларга рН₄8,О бўлган фосфат буфер эритмасидан 3 мл ва глюкозанинг 1 % ли эритмасидан 1 мл дан солиб аралаштирилади. Иккинчи пробиркага ферментатив реакцияни тўхтатиш учун 1 мл 10 % ли УХСК эритмаси солинади. Эритмалар устига мушак қиймасидан 1 г солинади. Эритмалар аралаштирилади ва унинг кислород билан таьсирланишни чеклаш учун 10 томчи вазелин ёғи билан қопланади. 37 ⁰С ли термостатга роса 1,5 соатга қўйилади.
   
2. 
   Оқсилларни чўктириш. Пробиркалар термостатдан олинади ва реакцияни тўхтатиш учун биринчи назорат эритмасига 1 мл 10 % ли УХСК эритмаси солинади. Натижада оқсиллар чўкмага тушади. Эритмалар бошқа тоза пробиркага фильтрланади.
   
3. 
   Углеводларни чўктириш. Оқсилдан холи қилинган углевод фильтратига мис сульфатнинг ярим тўйинтирилган эритмасидан 1 мл ва кальций гидроксид тузидан 0,5 г солинади. Пробиркалар қопқоқ билан зич қилиб бе ркитилади ва 15 дақиқа чайқатилади. Сўнгра эритмалар хўлланган фильтр қоғоздан ўтказилади. Бу йўл билан глюкозанинг ортиқча миқдори олиб ташланади.
   
4. 
   Сут кислотани аниқлаш фильтрат солинган пробиркалар муз хаммомида совитилади ва унга аста – секин концентрланган сульфат кислота томизилади. Томизиш вақтида пробиркалар чайқатиб турилади. Аралашманинг исишига йўл қўймаслик керак. Сут кислотанинг оксидланиши тезлатиш учун пробиркалар қайнаб турган сув хаммомига 4 дақиқага қўйилади. Вақт ўтгач пробиркалар муз хаммомида совитилади. Совитилган аралашмага вератралнинг 0,1 % ли спиртли эритмасидан 1 – 2 томчи солиб бир неча дақиқа аста чайқатилади. Биринчи пробиркада мушак ферментлари таьсирида гликолиз реакцияст ўтганлигидан сут кислота тўқ пушти ранг хосил қилади. Назорат пробиркада эса тажриба бошлангунча бўлган сут кислота оч пушти рангга киради.
   

Реактивлар: рН₄8, О бўлган фосфат буфер эритмаси, глюкоза эритмаси сирка кислотанинг 10 % ли эритмаси, мис сульфатнинг ярим тўйинтирилган эритмаси, кальций гидроксид тузи, концентрланган сульфат кислота, вератролнинг 0,1 % ли эритмаси.